CUEDC2對(duì)急性胰腺炎腺泡細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、急性胰腺炎（Acute pancreatitis，AP）是由多種病因引起的急性炎癥反應(yīng)，具有起病急驟，發(fā)展迅速，病情較重，并發(fā)癥較多等特點(diǎn)。臨床上大多數(shù)患著為輕度急性胰腺炎，病程呈自限性，預(yù)后較好，重度急性胰腺炎常伴有胰腺及周邊組織壞死，臨床病情兇險(xiǎn)，病死率高。AP的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，近年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡在AP的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，凋亡和壞死是AP時(shí)胰腺腺泡細(xì)胞死亡的兩種主要形式，二者最大本質(zhì)區(qū)別是凋亡細(xì)胞形成凋亡小體后很快被巨噬細(xì)

2、胞所吞噬，不引起或很少引起炎癥反應(yīng)，AP的嚴(yán)重性與壞死程度呈正相關(guān)，而與凋亡程度呈負(fù)相關(guān)。早期誘導(dǎo)腺泡細(xì)胞凋亡是治療AP的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
　　含CUE結(jié)構(gòu)域蛋白2（CUE domain containing2，CUEDC2）是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種蛋白。CUEDC2可以抑制核因子-κB（nuclear factor-κB， NF-κB）信號(hào)通路和Janus激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子（Janus kinase/signal transdu

3、cer and activator of tran-scriptions，JAK/STAT）信號(hào)通路，還能夠抑制巨噬細(xì)胞的激活及熱休克蛋白70的伴侶活性，CUEDC2也參與了細(xì)胞周期調(diào)節(jié)。文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn) CUEDC2在不同腫瘤中的表達(dá)水平及作用不同。同時(shí)，CUEDC2也參與了調(diào)控炎癥反應(yīng)，如梗阻性腎病、結(jié)腸炎相關(guān)腫瘤等。此外，CUEDC2還參與了心肌缺血再灌注損傷、慢性髓細(xì)胞白血病等細(xì)胞凋亡的相關(guān)研究。但目前尚無(wú) CUEDC2在急性胰腺炎

4、中作用研究的報(bào)道，因而本研究從細(xì)胞凋亡的角度分析CUEDC2對(duì)急性胰腺炎腺泡細(xì)胞的影響。
　　目的：應(yīng)用雨蛙素干預(yù)AR42J細(xì)胞建立AP離體細(xì)胞模型，采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)對(duì)AR42J細(xì)胞CUEDC2進(jìn)行過(guò)表達(dá)，探究CUEDC2對(duì)AP胰腺腺泡細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法：
　　1.應(yīng)用雨蛙素干預(yù)AR42J細(xì)胞建立AP模型。應(yīng)用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)，構(gòu)建過(guò)表達(dá)CUEDC2的AR42J細(xì)胞模型。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組：①陰性質(zhì)粒對(duì)照組（

5、Neg-CON）：轉(zhuǎn)染pEGFP-N1質(zhì)粒，完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；②CUEDC2質(zhì)粒對(duì)照組（CUEDC2-CON）：轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-CUEDC2質(zhì)粒，給予完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；③陰性質(zhì)粒雨蛙素組（Neg-CAE）：轉(zhuǎn)染pEGFP-N1質(zhì)粒，給予含10-7 mmol/L雨蛙素培養(yǎng)基培養(yǎng)；④CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組（CUEDC2-CAE）：轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-CUEDC2質(zhì)粒，給予含10-7 mmol/L雨蛙素培養(yǎng)基培養(yǎng)；再將細(xì)胞分為4h、8h

6、、24h三個(gè)亞組。
　　3.應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)CUEDC2 mRNA表達(dá)水平。應(yīng)用Western blot檢測(cè)CUEDC2、Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)水平。Annexin V-PE/7-AAD雙染聯(lián)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)造模后細(xì)胞早期凋亡率及晚期凋亡壞死率。
　　結(jié)果：
　　1.CUEDC2 mRNA表達(dá)：與對(duì)照組相比，雨蛙素組CUEDC2 mRNA表達(dá)量均降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），并且隨著時(shí)間的進(jìn)展，雨蛙素干預(yù)

7、的各組間表達(dá)水平無(wú)差異（P>0.05）。
　　2.建立過(guò)表達(dá)CUEDC2的AR42J細(xì)胞模型：比較各組CUEDC2蛋白表達(dá)水平，空白對(duì)照組和陰性質(zhì)粒組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；CUEDC2質(zhì)粒組表達(dá)高于其余兩組，與其余兩組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）?？烧J(rèn)為，成功建立了過(guò)表達(dá)CUEDC2的AR42J細(xì)胞模型。
　　3.Bax的表達(dá)：與各自對(duì)照組相比，陰性質(zhì)粒雨蛙素組和CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組Bax表達(dá)水平均增高

8、（P<0.05）。在兩個(gè)對(duì)照組中，CUEDC2質(zhì)粒對(duì)照組與陰性質(zhì)粒對(duì)照組相比，Bax表達(dá)增高（P<0.05），并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)無(wú)明顯變化。在兩個(gè)雨蛙素組中，CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組與陰性質(zhì)粒雨蛙素組相比，4h、8h時(shí)Bax表達(dá)增高（P<0.05），24h時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)差異（P>0.05），并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，陰性質(zhì)粒雨蛙素組Bax表達(dá)逐漸增高，至8h最高，24h與8h無(wú)統(tǒng)計(jì)差異，而CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組Bax表達(dá)與時(shí)間進(jìn)展無(wú)相關(guān)性。
　

9、　4.Bcl-2的表達(dá)：與各自對(duì)照組相比，陰性質(zhì)粒雨蛙素組和CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組Bcl-2表達(dá)水平均增高（P<0.05）。在兩個(gè)對(duì)照組中，CUEDC2質(zhì)粒對(duì)照組與陰性質(zhì)粒對(duì)照組相比，Bcl-2表達(dá)降低（P<0.05），并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)無(wú)明顯變化。在兩個(gè)雨蛙素組中，CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組與陰性質(zhì)粒雨蛙素組相比，4h、8h時(shí)Bcl-2表達(dá)降低（P<0.05），24h時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)差異（P>0.05），并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，陰性質(zhì)粒雨蛙素組Bcl

10、-2表達(dá)逐漸降低，至8h最低，24h與8h無(wú)統(tǒng)計(jì)差異，而CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組Bcl-2表達(dá)與時(shí)間進(jìn)展無(wú)相關(guān)性。
　　5.Bax/Bcl-2比值：與各自對(duì)照組相比，陰性質(zhì)粒雨蛙素組和CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組Bax/Bcl-2比值均增高（P<0.05）。在兩個(gè)對(duì)照組中，CUEDC2質(zhì)粒對(duì)照組與陰性質(zhì)粒對(duì)照組相比，Bax/Bcl-2比值增高（P<0.05），隨著時(shí)間延長(zhǎng)無(wú)明顯變化。在兩個(gè)雨蛙素組中，CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組與陰性質(zhì)粒

11、雨蛙素組相比，4h、8h時(shí) Bax/Bcl-2比值增高（P<0.05），24h時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)差異（P>0.05），并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，陰性質(zhì)粒雨蛙素組Bax/Bcl-2比值逐漸增高，至8h最高，24h與8h無(wú)統(tǒng)計(jì)差異，而CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組 Bax/Bcl-2比值與時(shí)間進(jìn)展無(wú)相關(guān)性。并且，陰性質(zhì)粒對(duì)照組Bax/Bcl-2比值小于1，即Bcl-2相對(duì)較高，而CUEDC2過(guò)表達(dá)后或者雨蛙素干預(yù)后Bax/Bcl-2比值大于1，即Bax相對(duì)較高。<

12、br>　　6.細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡壞死率：與各自對(duì)照組相比，陰性質(zhì)粒雨蛙素組和 CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組早期凋亡率和晚期凋亡壞死率均增高（P<0.05）。在兩個(gè)對(duì)照組中，CUEDC2質(zhì)粒對(duì)照組與陰性質(zhì)粒對(duì)照組相比，早期凋亡率增高，晚期凋亡壞死率降低（P<0.05）。在兩個(gè)雨蛙素組中，CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組與陰性質(zhì)粒雨蛙素組相比，8h時(shí)早期凋亡率增高，晚期凋亡壞死率降低（P<0.05），而在24h時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)差異（P>0.05）。