DDFA對重癥急性胰腺炎大鼠肝臟細胞凋亡及Bax，Bcl-2基因表達的影響.pdf

1、研究背景： 急性胰腺炎(acutepancreatitis，AP)是臨床上一種表現(xiàn)兇險、死亡率高的急腹癥之一，也是最易發(fā)生多器官功能障礙綜合癥(MODS)的疾病之一，并發(fā)MODS成為本病的主要死亡原因。重癥急性胰腺炎(severeacutepancreatitis，SAP)不但累及胰腺，而且累及肝、肺及腎臟等遠處器官。肝臟作為主要的受損器官，在病變加重時可發(fā)展成為肝衰竭，一旦肝功能衰竭發(fā)生，就會導致死亡。此外，由于其具有復雜的生

2、理功能以維持機體內環(huán)境穩(wěn)定，肝臟在AP病情發(fā)展中具有十分特殊的作用。方馳華首先應用DDFA方案治療SAP取得明顯效果，但是其作用機制并不明確。地塞米松屬于糖皮質激素，具有抗炎、抗菌、抗休克、抗過敏等重要藥理作用。低分子右旋糖酐是葡萄糖聚合物的膠體溶液，通過其膠體滲透壓產(chǎn)生擴容、抗凝、改善微循環(huán)作用。5-Fu治療AP的作用，主要是通過抑制胰腺外分泌而發(fā)揮作用的。抑肽酶可以明顯降低急性胰腺炎血漿及胰組織勻漿內淀粉酶及脂肪酶濃度，且使胰腺的病

3、理變化減輕，說明抑肽酶抑制了急性胰腺炎的高分泌狀態(tài)，使胰腺的自身消化程度明顯減輕。有研究表明AP大鼠發(fā)現(xiàn)肝細胞有凋亡發(fā)生，并且肝細胞凋亡可能是肝細胞功能衰竭的重要原因。細胞凋亡是受基因調控的，而細胞凋亡調控基因中最受關注的就是Bcl-2家族。DDFA治療方案對大鼠SAP的肝細胞凋亡有何作用?相關的調控基因對肝細胞的凋亡又是如何調控的?此研究著重于觀察DDFA治療方案對肝臟細胞凋亡及凋亡調控基因的影響，探討DDFA的作用機制。 目

4、的： 探討重癥急性胰腺炎大鼠肝臟細胞凋亡和凋亡調控基因Bax和Bcl-2的變化及應用DDFA治療對細胞凋亡和凋亡調控基因的影響，從而了解細胞凋亡在SAP肝臟損傷中的作用以及DDFA治療SAP肝臟損傷的部分機制。 方法： SD大鼠57只，雌、雄不限，體重250g～300g。實驗分組：假手術組9只；SAP組24只；DDFA治療組24只。每組再分為6h、12h、24h三個時間點，假手術組每個時間點分配3只大鼠，SAP組

5、和DDFA治療組每個時間點分配8只大鼠。SAP組以胰尾被膜下穿刺注射50g/L牛黃膽酸鈉誘導制作重癥急性胰腺炎模型。DDFA組于模型誘發(fā)后，經(jīng)頸靜脈注射地塞米松(0.05mg/100g)+右旋糖酐(4ml/100g)+5-Fu(4mg/100g)+抑肽酶(5000U/100g)；假手術組僅牽拉胰腺。 各組在6h、12h、24h三個時間點處死大鼠，心臟穿刺抽血，進行BIL、AST、ALT測定；經(jīng)原切口入腹取肝臟組織，以10％(10

6、0ml/L)中性緩沖甲醛液固定后，石蠟包埋，每蠟塊行4μm厚連續(xù)切片。HE染色光鏡下觀察肝臟的病理變化。 采用DNA末端原位標記法(TUNEL法)，光鏡下計算肝臟細胞凋亡指數(shù)(ApoptoticIndex，AI)。AI計算方法：數(shù)4個高倍視野，分別計算凋亡細胞數(shù)和總細胞數(shù)，AI=凋亡細胞數(shù)/總細胞數(shù)×100％；免疫組化SABC法檢測肝臟組織中基因BaxBcl-2蛋白表達。統(tǒng)計學分析方法：實驗結果計量資料值以-x±s顯示，各組均數(shù)

7、比較用完全隨機設計資料的方差分析，SAP組與SO、DDFA組組間兩兩比較用Dunnett法，細胞凋亡與肝功能改變的關系用相關分析。P＜0.05為差異有顯著性意義。統(tǒng)計軟件采用SPSS10.0。 結果： HE染色后各組光鏡下所見：假手術組未見異常；SAP組6h時肝臟輕度腫脹，肝臟細胞輕度水腫；12h時肝臟腫脹加重伴炎性細胞浸潤改變；24h時肝臟可見局灶性或不規(guī)則片狀壞死，肝竇及匯管區(qū)周圍大量炎性細胞浸潤及散在紅細胞；DDF

8、A組各時間點鏡下所見均較SAP組減輕。 SAP時BIL、AST、ALT明顯升高，且隨著病程延長而逐漸增高；應用DDFA治療后，BIL、AST、ALT下降，但仍有隨著病程延長而逐漸增高的趨勢。統(tǒng)計學處理SAP組與SO、DDFA組組間兩兩比較用Dunnett法有顯著性差異(P＜0.05)。 TUNEL染色結果表明：SAP組凋亡細胞明顯增多，凋亡指數(shù)升高，并隨著病程延長而逐漸增高，DDFA組凋亡指數(shù)較SAP組明顯下降。統(tǒng)計學處

9、理SAP組與SO、DDFA組組間兩兩比較用Dunnett法有顯著性差異(P＜0.05)。 假手術組Bax、Bcl-2基因的表達均較弱；SAP組Bax基因有表達，尚隨著病程延長而逐漸增高，Bcl-2表達值隨著病程延長而逐漸下降；DDFA組與SAP組比較，Bax基因表達明顯下調，而Bcl-2基因表達明顯上調。統(tǒng)計學處理SAP組與SO、DDFA組組間兩兩比較用Dunnett法有顯著性差異(P＜0.05)。 相關分析顯示細胞凋亡

10、指數(shù)與肝功能指標變化(AST、ALT、BIL)呈明顯正相關。 結論： SAP大鼠肝臟損傷至少部分是通過細胞凋亡機制引起的，即細胞凋亡是造成SAP肝臟損害的重要因素之一。 DDFA治療大鼠重癥急性胰腺炎可以明顯地改善大鼠病變的肝臟組織形態(tài)和肝功能的水平； DDFA治療重癥急性胰腺炎的機制之一可能是阻止損傷的肝臟細胞調亡。DDFA的作用機制可能是抑制Bax基因表達，促進Bcl-2基因表達從而影響細胞凋亡實現(xiàn)的