骨髓間充質干細胞對重癥急性胰腺炎大鼠急性肺損傷P38 MAPK表達的影響.pdf

1、本實驗研究包括兩大部分,第一部分觀察p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)在肺組織的表達,探討p38MAPK通路在重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)急性肺損傷(acute lung injury,ALI)發(fā)病機制中的作用;第二部分向SAP急性肺損傷大鼠模型移植同種異體骨髓間充質干細胞(bone marrow mesen

2、chymal stem cells,BMSCs),研究其是否能部分阻斷p38MAPK通路,抑制炎癥因子的釋放,調節(jié)AQP1表達,減輕肺水腫,進一步闡明BMSCs治療重癥急性胰腺炎的分子機制,為今后BMSCs治療SAP提供實驗依據(jù)。
　　第一部分：重癥急性胰腺炎大鼠p38絲裂原活化蛋白激酶的表達與肺毛細血管內皮屏障損傷的研究
　　目的：研究p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein k

3、inase,p38MAPK)在重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肺組織中的表達情況,并初步探討p38MAPK與SAP肺毛細血管內皮屏障損傷的關系。
　　方法：將40只健康雄性SD大鼠隨機(隨機數(shù)字表法)分為假手術(SO)組和SAP組,SAP組又分為3h、6h、12h及24h4個時間點組,共5組,每組8只。采用胰膽管逆行注射5％?；悄懰徕c的方法建立SAP大鼠模型。采用全自動生化分析儀檢測

4、大鼠血清淀粉酶含量;采用HE染色方法觀察5組大鼠肺和胰腺組織的病理學改變;采用Elisa法檢測血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白細胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;采用免疫組化方法檢測肺組織中磷酸化p38(p-p38)蛋白和水通道蛋白1(aquaporin1,AQP1)的表達水平;采用實時定量熒光PCR法(real-time PCR)檢測肺組織中AQP1mR

5、NA的表達水平。
　　結果：SAP各時間點組大鼠肺組織充血水腫,炎癥細胞浸潤;胰腺組織可見大片壞死,部分腺葉結構模糊甚至消失;血清淀粉酶、TNF-α和IL-1β水平均較SO組高(P<0.05)。SO組大鼠肺組織中p-p38蛋白僅有微量表達,而在SAP3h組,p-p38蛋白的表達就明顯上調,在6h時達高峰,24h時仍高于SO組(P<0.05)。SAP各時間點組大鼠肺組織中AQP1mRNA及其蛋白的表達均較SO組下調(P<0.05),

6、并隨著時間的推移而逐漸下調;SAP組大鼠AQP1mRNA的表達與TNF-α、IL-1β及p-p38蛋白之間均存在負相關關(r=-0.87,P<0.05;r=-0.88,P<0.05;r=-0.78,P<0.05)。
　　結論：肺組織中AQP1表達的下調是SAP肺毛細血管內皮屏障損傷的重要原因之一,其可能與p38MAPK的激活及炎癥因子的過度釋放有關。
　　第二部分：骨髓間充質干細胞對重癥急性胰腺炎大鼠肺毛細血管通透性的影響<

7、br>　　目的：探討骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)對重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肺毛細血管滲漏的保護作用及其機制。
　　方法：將56只健康雄性SD大鼠隨機(隨機數(shù)字表法)分為假手術(SO)組、模型(SAP)組和治療(BMSCs)組,SAP組和BMSCs組又分為6h、12h、24h三個亞組,每組8只SD大鼠。采用5%

8、牛磺膽酸鈉胰膽管逆行注射建立SAP大鼠模型,BMSCs組經(jīng)股靜脈輸注BMSCs懸液。采用全自動生化分析儀檢測大鼠血清淀粉酶含量;采用HE染色方法觀察各組大鼠肺和胰腺組織的病理學改變;采用Elisa法檢測血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白細胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;采用免疫組化方法檢測肺組織中磷酸化p38(p-p38)蛋白和水通道蛋白1(aquapor

9、in1,AQP1)的表達水平;采用實時定量熒光PCR法(real-time PCR)檢測肺組織中AQP1mRNA的表達水平。
　　結果：與SO組比較,SAP組各時間點胰腺、肺組織病理學改變明顯,血清淀粉酶、TNF-α、IL-1β水平明顯上調;SAP組、BMSCs組磷酸化p38蛋白表達水平高于SO組,而AQP1基因與蛋白表達水平下調,但BMSCs組與SAP組比較,磷酸化p38表達顯著下調,AQP1基因與蛋白表達水平顯著上升,并且肺、