Notch2和B-catenin在人恒牙牙髓及牙乳頭中的表達(dá).pdf

1、目的:
　　 在牙齒發(fā)育期間，牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞，形成原發(fā)性牙本質(zhì)；在牙齒萌出后，無論年輕恒牙，還是成熟恒牙，牙髓在受創(chuàng)傷和感染時，牙髓組織中的成牙本質(zhì)細(xì)胞和新分化的成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞就會形成第三期牙本質(zhì)和修復(fù)性牙本質(zhì)，表明牙髓組織具有較強(qiáng)的自我防御能力和自身修復(fù)潛能。關(guān)于成牙本質(zhì)細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的分化以及牙本質(zhì)形成的確切機(jī)制還不完全清楚，但目前認(rèn)為一些生物分子如轉(zhuǎn)錄因子、信號分子、生長因子、細(xì)胞外基質(zhì)分

2、子等參與調(diào)節(jié)牙髓組織中的細(xì)胞增殖、分化和基質(zhì)合成。
　　 Notch2是Notch信號蛋白家族成員，是一種跨膜蛋白，可影響發(fā)育過程中多種細(xì)胞的分化、增殖和凋亡，在多細(xì)胞動物發(fā)育的細(xì)胞分化中起重要作用，是多種組織和器官早期發(fā)育所必需的細(xì)胞間調(diào)節(jié)信號。β連環(huán)蛋白(beta-catenin，β-catenin)為細(xì)胞骨架蛋白即連環(huán)蛋白的家族成員之一，是Wnt信號通路的核心因子，與牙胚發(fā)育之間有著密切的關(guān)系。目前有關(guān)Notch2及β-c

3、atenin在年輕恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳頭組織中表達(dá)的研究鮮有報道。而對這一問題的深入研究和探討，將有助于我們進(jìn)一步認(rèn)識牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的發(fā)育、成熟以及年輕恒牙牙髓修復(fù)能力的生物學(xué)機(jī)制。
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用RT-PCR，免疫組化及Western-blot技術(shù)檢測Notch2和β-catenin在人年輕恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳頭組織中的表達(dá)，并進(jìn)行比較以探尋它們在牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體發(fā)育和成熟中的作用及二者在該過程中是否存在相關(guān)性。<

4、br>　　 材料和方法:
　　 收集51例因正畸或阻生拔除的健康無齲的牙齒，研究對象年齡為11～30歲，均無全身系統(tǒng)性疾病，近三個月未曾服用免疫制劑和抗菌藥物。牙齒拔除后立即將年輕恒牙的牙乳頭用鑷子分離，凍存；然后將牙齒縱向劈開，完整取出牙髓組織，凍存。成熟恒牙直接將牙齒縱向劈開，完整取出牙髓組織，凍存。
　　 按恒牙牙根發(fā)育的八個階段，結(jié)合臨床和X光片檢查，將R2/3，R3/4的年輕恒牙的牙乳頭組織歸為第1組；將R2

5、/3，R3/4的年輕恒牙的牙髓組織歸為第2組；將Ac的成熟恒牙的牙髓組織歸為第3組(R2/3代表牙根形成2/3;R3/4代表牙根形成3/4；Ac代表根尖已封閉)。每組各24例，其中12例樣本用于RT-PCR檢測，12例樣本用于Western-blot檢測；另外有3例用于免疫組化檢測。
　　 對Notch2及β-catenin進(jìn)行基因水平和蛋白水平的檢測，并以β-actin為內(nèi)參，用圖像分析軟件分析陽性條帶的強(qiáng)度（即灰度值的測定）

6、，采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包，應(yīng)用兩樣本t檢驗(yàn)對Notch2和β-catenin在年輕恒牙牙乳頭與牙髓組織以及年輕恒牙牙髓與成熟恒牙牙髓組織之間的表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行比較；Spearman相關(guān)分析用于Notch2與β-catenin在恒牙牙乳頭和牙髓組織中表達(dá)強(qiáng)度的相關(guān)性分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 免疫組化染色顯示β-catenin和Notch2在年輕恒牙的根尖牙乳頭組織、年

7、輕恒牙的牙髓組織和成熟恒牙的牙髓組織中均有不同程度的表達(dá)，表達(dá)細(xì)胞為成纖維細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞；β-catenin在胞核和胞漿中著色，Notch2在胞漿中著色。
　　 RT-PCR和Western-blot實(shí)驗(yàn)表明Notch2及β-catenin在年輕恒牙的牙乳頭、牙髓和成熟恒牙的牙髓組織中均有表達(dá)。二者在年輕恒牙牙髓組織中的表達(dá)強(qiáng)于其在年輕恒牙牙乳頭組織以及成熟恒牙牙髓組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05

8、)。而Notch2與β-catenin二者的表達(dá)強(qiáng)度之間則無統(tǒng)計學(xué)意義上的相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、無論在mRNA水平，還是在蛋白水平，Notch2和β-catenin在人恒牙的牙乳頭和牙髓組織中均有表達(dá)。Notch2和β-catenin在年輕恒牙牙髓組織中的表達(dá)強(qiáng)度高于年輕恒牙牙乳頭組織，也高于成熟恒牙牙髓組織．
　　 2、β-catenin和Notch2在人年輕恒牙的牙乳頭、牙髓及成