牙髓干細(xì)胞與牙乳頭細(xì)胞生長(zhǎng)分化調(diào)控因素的研究.pdf

1、牙髓干細(xì)胞是牙齒組織工程重要的種子細(xì)胞之一，具有增殖能力強(qiáng)，自我更新及多向分化的能力，在維持牙髓組織的動(dòng)態(tài)平衡中發(fā)揮了重要作用。由于牙齒發(fā)育是一個(gè)長(zhǎng)期而復(fù)雜的過程，這期間受多種因素的影響，機(jī)體自身的狀態(tài)、牙齒所處的局部微環(huán)境以及組織內(nèi)細(xì)胞間的相互作用、細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)分子的調(diào)控等因素都參與調(diào)控牙齒的發(fā)育。本實(shí)驗(yàn)通過比較幼年期和成年期大鼠牙髓干細(xì)胞的增齡性變化，以期更深入的了解牙髓干細(xì)胞的基本特性，并將不同時(shí)期的發(fā)育微環(huán)境作用于牙髓干細(xì)胞，觀

2、察對(duì)其生物學(xué)特性的影響，并利用RNAi技術(shù)沉默牙髓干細(xì)胞的前體細(xì)胞牙乳頭細(xì)胞中的頜面發(fā)育相關(guān)新基因Mcpr1，以觀察Mcpr1對(duì)牙乳頭細(xì)胞增殖能力的影響。
　　所取的研究結(jié)果如下：
　　1、不同時(shí)期牙髓干細(xì)胞生物學(xué)特性的比較
　　本實(shí)驗(yàn)利用了生后2周和4月齡SD大鼠作為研究模型，首先原位切片觀察兩個(gè)時(shí)期牙髓的組織學(xué)差異，然后體外培養(yǎng)牙髓干細(xì)胞，用MTT，及細(xì)胞周期的方法檢測(cè)兩個(gè)時(shí)期牙髓干細(xì)胞增殖能力的差異，堿性磷酸酶試

3、劑盒檢測(cè)ALP活性，Real-timePCR檢測(cè)兩個(gè)時(shí)期細(xì)胞表達(dá)成骨基因的差異，比較礦化誘導(dǎo)液誘導(dǎo)兩個(gè)時(shí)期牙髓干細(xì)胞后其體外的礦化能力，將兩個(gè)時(shí)期的牙髓干細(xì)胞做成細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行大鼠腎被膜下移植，比較其體內(nèi)礦化能力。結(jié)果顯示：幼年鼠牙髓干細(xì)胞較成年鼠有著較強(qiáng)的增殖能力，而成年鼠牙髓干細(xì)胞較幼年鼠有較強(qiáng)的礦化能力。
　　2、牙髓細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)不同時(shí)期牙髓干細(xì)胞增殖分化能力的影響
　　為了驗(yàn)證細(xì)胞微環(huán)境對(duì)牙髓干細(xì)胞的增殖分化是否有影

4、響，我們獲取幼年鼠和成年鼠兩個(gè)時(shí)期的牙髓細(xì)胞，并收集其細(xì)胞條件培養(yǎng)液，分別用這兩個(gè)時(shí)期的牙髓細(xì)胞條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)這兩個(gè)時(shí)期的牙髓干細(xì)胞，檢測(cè)牙髓干細(xì)胞增殖與骨向分化能力的改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：成年鼠牙髓干細(xì)胞經(jīng)過幼年鼠牙髓細(xì)胞條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)后增殖能力變強(qiáng)，而幼年鼠牙髓干細(xì)胞經(jīng)過成年鼠牙髓細(xì)胞條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)后增殖能力變?nèi)?。在分化方面，亦表現(xiàn)出同樣的趨勢(shì)，經(jīng)過成年鼠牙髓細(xì)胞條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)的幼年鼠牙髓干細(xì)胞分化能力變強(qiáng)，而經(jīng)過幼年鼠牙髓細(xì)胞條件培

5、養(yǎng)液誘導(dǎo)的成年鼠牙髓干細(xì)胞的骨向分化能力變?nèi)?。以上結(jié)果提示細(xì)胞條件培養(yǎng)液可以作為一種微環(huán)境改變由于年齡因素所帶來的生物學(xué)特性的差異。
　　3、Mcpr1對(duì)牙乳頭細(xì)胞增殖能力的影響
　　為了驗(yàn)證頜面發(fā)育相關(guān)新基因Mcpr1是否在牙齒發(fā)育中也發(fā)揮一定的作用，我們利用RNAi技術(shù)，沉默牙乳頭細(xì)胞中的Mcpr1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：沉默Mcpr1后對(duì)牙乳頭細(xì)胞增殖具有促進(jìn)作用，說明Mcpr1具有抑制牙乳頭細(xì)胞增殖的作用。此結(jié)果提示Mcpr1不