提高牙髓干細胞牙向分化潛能的研究.pdf

1、福建師范大學碩士學位論文提高牙髓干細胞牙向分化潛能的研究姓名：王放放申請學位級別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學指導教師：張彥定20090601中文文摘中文文摘隨著人們生活質(zhì)量的提高，人們對牙齒的關注也越來越多。人們不僅想買最好的牙膏使自己的牙齒保持潔白，還想它能夠永遠健康，沒有齲齒，沒有壞牙。然而牙齒的缺失或者損傷又不可避免的常常敲響健康者的大門，盡管這并不是致命的，但卻讓人寢食難安。因此研究牙齒再生的重大課題就毫無疑問地成了科學家不可推卸的責

2、任。研究已證明，牙齒發(fā)育是依賴牙上皮一牙間充質(zhì)之間相互誘導而進行的。另外，牙齒的組織形態(tài)學和分子機制是所有器官中研究最為透徹的。而且牙齒是人體中唯一能在成體中再次發(fā)育而且結構相對簡單的一個器官。因此，從器官發(fā)育的角度出發(fā)，牙齒的再生要比其他器官的再生更為容易，更有可能實現(xiàn)。隨著千細胞技術的不斷推廣，目前已經(jīng)有多個研究小組采用胚胎干細胞、骨髓基質(zhì)細胞、作為間充質(zhì)源性細胞進行再生牙齒的研究；利用成體牙髓干細胞進行研究的也有幾例但都沒取得突破

3、性的進展。06，07兩年間，IPS細胞的誕生給了我們新的研究視角。采用慢病毒技術在體外對牙髓干細胞進行誘導用以研究牙髓干細胞牙向分化潛能及找出一種促進牙髓干細胞牙向分化的關鍵因子便成了本課題的主要內(nèi)容。首先，本研究選擇三種在牙齒發(fā)育過程中的重要基因作為候選因子BMP4、MSXl、PAX9，將它們分別克隆到慢病毒載體PNLIRES2EGFP上，形成了三種新的慢病毒載體燦hBmp4IRES2EGFP、pNLhMsxIIRES2EGFP和pN

4、LhPax9Ⅱ己ES2一EGFP。第二，將這三種慢病毒載體連同另外兩種質(zhì)粒VSVG和pHelpel“分別轉(zhuǎn)染293T細胞大量生產(chǎn)濃縮出高滴度的病毒。將生產(chǎn)的慢病毒分別以MOI(感染復數(shù))=10，20，30，40，50，60來感染牙髓干細胞，以確定感染牙髓干細胞的最佳MOI。結果表明，當MOI=50時感染效率最高，可以達到728％。因此以MOI=50的感染量來進行以下的誘導實驗。第三，將三種病毒分為以下六組分別感染牙髓干細胞：1，用單一一