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1、目的:研究膽固醇對人肝細胞c反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)基因表達的影響并初步探討其機制。 方法:分別以濃度為6.25mg/L,12.5mg/L,25.0mg/L,50.0mg/L的膽固醇作用人肝細胞L-02,采用real-time PCR法檢測細胞中CRP mRNA轉(zhuǎn)錄情況;Westernblot檢測細胞內(nèi)CRP基因表達;免疫比濁法檢測細胞培養(yǎng)液中CRP含量,觀察膽固醇對L-02細胞CRP基因表達的影
2、響。NF-KB信號通路的阻斷劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine ditiocarbamate PDTC)干預(yù)膽固醇作用L-02細胞的反應(yīng),比較NF-KB信號通路阻斷前后CRP表達量的變化;用熒光分光光度計測定膽固醇刺激細胞后細胞內(nèi)第二信使鈣離子濃度變化情況,初步探討膽固醇誘導(dǎo)CRP基因表達的分子機制。 結(jié)果:膽固醇能誘導(dǎo)人肝細胞C反應(yīng)蛋白的表達(P<0.05),其誘導(dǎo)效應(yīng)隨濃度增加而增強,同時細胞內(nèi)鈣離子濃度隨膽固
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