鉤端螺旋體脈沖場凝膠電泳標準化技術建立及初步應用研究.pdf

1、本實驗旨在將PFGE分型技術引入鉤體，建立我國鉤體PFGE標準化操作程序，進一步從染色體DNA角度分析鉤體分類特征，為遺傳學分類奠定基礎。 參照目前美國CDC及亞太地區(qū)PulseNet提供的其它病原體PFGE標準化操作程序，結合鉤體菌株特性，對菌體基因組染色體DNA純化技術、限制性內切酶消解方案及脈沖場電泳參數進行優(yōu)化，初步建立了我國鉤體脈沖場凝膠電泳標準化操作程序，并對我國15群15型問號鉤體標準菌株和16群21型雙曲鉤體標準

2、菌株進行鑒定分析，獲得了高清晰度酶切圖譜，各株菌都有獨特的帶型分布，且結果重復性好，分辨率高，圖譜質量達到PulseNet的要求，實驗室間具有可比性。 進一步對我國四川、安徽、江西、湖南四省的245株地方分離株進行鑒定分析，并與15群15型標準菌株進行聚類分析，發(fā)現我國鉤體的黃疸出血群、流感傷寒群、澳洲群、犬群、七日熱群帶型與其標準菌株帶型相似，都具有優(yōu)勢基因型，不同血清群之間帶型完全不同，同一血清群內帶型差異較小，同一血清型表

3、現出較多帶型，但相似性很高。賽羅群內不同血清型之間帶型差異較大，但是同一血清型內帶型高度相似。秋季群帶型最為復雜，與其標準株帶型沒有相似之處，各帶型之間差異較大。其它血清群菌株數量太少，在本研究中未發(fā)現相同的結論。本實驗所使用的245株分離株中，其中有38株未能鑒定出血清群，通過聚類分析，37株能夠判斷血清群。 本實驗中所有標準菌株原始資料完整，血清學分類可靠，涵蓋了我國鉤體常見的血清群和血清型，可以作為鉤體PFGE數據庫中的基