牽張應(yīng)變誘導(dǎo)HPDLCs凋亡信號通路的實驗研究.pdf

1、目的:牙齒受力時,外力通過牙周膜傳遞并分散至頜骨,從而引發(fā)牙周組織對外力作用的生理應(yīng)答。牙周膜細(xì)胞對機械刺激的反應(yīng)在牙周改建中具有非常重要的作用。前期研究表明,牽張力可以引起牙周膜細(xì)胞早期凋亡,但是具體機制尚不清楚,因此本研究力圖探討牽張力引起牙周膜細(xì)胞凋亡的信號通路,以期能夠為口腔修復(fù)和正畸合理選擇基牙,牙齒合理施力以及牙周病防治等方面提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法：通過原代和傳代培養(yǎng)獲得生長穩(wěn)定的實驗用人牙周膜細(xì)胞,然后利

2、用動態(tài)機械應(yīng)變細(xì)胞加載裝置對人牙周膜細(xì)胞加載1％、10％和20％的動態(tài)牽張應(yīng)變6h、12h、24h和48h,通過流式細(xì)胞儀和激光掃描共聚焦顯微鏡對經(jīng)過TUNEL染色的細(xì)胞進(jìn)行晚期凋亡檢測,同時利用酶標(biāo)儀檢測Caspase-3活性以及添加Caspase-8和Caspase-9阻斷劑后Caspase-3活性,并采用基因芯片檢測細(xì)胞在不同機械應(yīng)變下凋亡相關(guān)基因的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、人牙周膜細(xì)胞在體外培養(yǎng)4～8代

3、的性狀穩(wěn)定,適宜于進(jìn)行力學(xué)加載實驗；
　　 2、細(xì)胞加載后,呈現(xiàn)柵欄狀相互平行排列的趨勢,細(xì)胞排列方向垂直于牽張力方向,且隨著加載應(yīng)變和加載時間的增加,細(xì)胞相互平行的趨勢愈明顯；
　　 3、通過流式細(xì)胞儀對TUNEL染色的細(xì)胞檢測發(fā)現(xiàn),各應(yīng)變組細(xì)胞的晚期調(diào)亡率在加載24h時達(dá)到該應(yīng)變組的峰值,且具有一定的時間和應(yīng)變值依賴性,但隨著加載時間的延長,48h時各應(yīng)變組細(xì)胞的晚期調(diào)亡率均下降；
　　 4、通過酶標(biāo)儀檢測C

4、aspase-3蛋白酶活性發(fā)現(xiàn),Caspase-3活性具有一定的時間和應(yīng)變值依賴性,各應(yīng)變組細(xì)胞的Caspase-3活性在加載24h時達(dá)到該應(yīng)變組的峰值,和晚期凋亡率變化趨勢一致；
　　 5、通過阻斷實驗發(fā)現(xiàn),Caspase-9激活Caspase-3介導(dǎo)的凋亡通路參與了牽張應(yīng)變誘導(dǎo)HPDLCs的凋亡；
　　 6、通過基因芯片檢測牽張應(yīng)變前后凋亡相關(guān)基因變化的研究發(fā)現(xiàn),20％-6h組和20％-24h組分別與對照組比較均有9

5、個表達(dá)上調(diào)基因和2個表達(dá)下調(diào)基因,20％-6h組和20％-24h組比較有2個表達(dá)上調(diào)基因和1個表達(dá)下調(diào)基因。
　　 結(jié)論：通過動態(tài)機械應(yīng)變細(xì)胞加載裝置對人牙周膜細(xì)胞的牽張加載,發(fā)現(xiàn)牽張應(yīng)變可以誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生晚期凋亡,且具有時間和應(yīng)變值依賴性,24h時晚期調(diào)亡率達(dá)到峰值,Caspase-3活性與凋亡率變化趨勢一致,且Caspase-9激活Caspase-3介導(dǎo)的凋亡通路參與了牽張應(yīng)變誘導(dǎo)HPDLCs的凋亡。此外,通過基因芯片檢測,初