凋亡和自噬在心梗后心衰大鼠因瘀致虛的作用.pdf

1、目的:
　　觀察心肌梗死（心梗）后6周內(nèi)不同時間點(diǎn)大鼠的證候特點(diǎn)，揭示其證候的演變規(guī)律;試圖分析凋亡和自噬的動態(tài)變化特點(diǎn)，初步探討該病證候模型因瘀致虛的發(fā)病機(jī)制，為臨床治則治法的調(diào)整提供參考依據(jù)。
　　方法:
　　通過左冠狀動脈前降支結(jié)扎法建立大鼠心梗模型，以術(shù)后存活大鼠作為模型組，設(shè)6個時間點(diǎn):1d、3d、7d、14d、28d、42d，每個時間點(diǎn)各15只，并設(shè)立同期假手術(shù)組，每個時間點(diǎn)各10只。觀察一般情況至實(shí)驗(yàn)結(jié)束

2、點(diǎn)后，行血流動力學(xué)檢測評價(jià)大鼠心功能和測定血漿中血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)和腦鈉肽（Brain Natriuretic Peptide，BNP）的濃度，通過電鏡觀察、免疫組化和免疫熒光測定自噬和凋亡在證侯轉(zhuǎn)變過程中的演變規(guī)律。
　　結(jié)果:
　　1.一般情況:術(shù)后1～7d，模型組大鼠呈拱背站立體位，呼吸急促，對外界刺激敏感，易激惹，毛蓬松豎立等心血瘀實(shí)證表現(xiàn)。術(shù)后15～42d，模型組大鼠陸續(xù)出現(xiàn)心氣虛表

3、現(xiàn):神倦嗜臥，精神萎靡，毛色萎黃，對外界刺激逐漸反應(yīng)遲鈍，抓起時反抗輕等心氣虛衰的表現(xiàn)。與假手術(shù)組相比差別明顯。
　　2.血流動力學(xué)測定:1d、3d模型組大鼠LVSP、LVEDP、±dp/dtmax與同期假手術(shù)組無差別(P＞0.05)。7d模型組大鼠LVSP、+dp/dtmax低于同期假手術(shù)組大鼠，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而LVEDP、-dp/dtmax兩組之間無差別(P＞0.05)。術(shù)后14～42d，模型組大鼠LVSP、±

4、dp/dtmax明顯低于同期假手術(shù)組(P＜0.05)，LVEDP則高于同期假手術(shù)組(P＜0.05)。與同組前一實(shí)驗(yàn)點(diǎn)大鼠相比，14、28d模型組大鼠LVSP、±dp/dtmax明顯下降(P＜0.01)，LVEDP則升高(P＜0.05)，而模型組42d與28d相比，LVSP、LVEDP、±dp/dtmax無差別(P＞0.05)。
　　3.神經(jīng)內(nèi)分泌因子檢測:模型組各實(shí)驗(yàn)點(diǎn)大鼠血漿AngⅡ、BNP的濃度均高于同期假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義(P＜0.01)。其中，AngⅡ與BNP于術(shù)后3d、7d時上升最快，其濃度與同組前一實(shí)驗(yàn)點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.心臟組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠心室前壁梗死明確，并在心肌梗死后實(shí)驗(yàn)時間段內(nèi)梗死范圍逐漸擴(kuò)大，心肌變薄，超微結(jié)構(gòu)也發(fā)生了改變，同時通過透射電鏡觀察到模型組大鼠心肌細(xì)胞存在凋亡、自噬性死亡兩種不同的細(xì)胞死亡方式。
　　5.免疫組化法測量Caspase-3和Belin在非梗死區(qū)和

6、梗死交界區(qū)中表達(dá)情況:模型組各實(shí)驗(yàn)點(diǎn)梗死交界區(qū)Caspase-3和Belin的表達(dá)顯著增高（P＜0.01），非梗死區(qū)Belin的表達(dá)高于同期假手術(shù)組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。d1、d3非梗死區(qū)Caspase-3的表達(dá)與同期假手術(shù)組比較無差別（P＞0.05），術(shù)后d7～d42非梗死區(qū)Caspase-3的表達(dá)則高于同期假手術(shù)組(P＜0.05)。
　　6.免疫熒光雙標(biāo)測在梗死區(qū)與非梗死區(qū)中LC3和tunel的雙標(biāo)記情況:模型組別各

7、實(shí)驗(yàn)點(diǎn)交界區(qū)LC3表達(dá)顯著上升，tunel測定的心肌細(xì)胞凋亡數(shù)明顯比對照組高(P＜0.01)，非梗死區(qū)LC3的表達(dá)高于同期假手術(shù)組(P＜0.05)，d7～d42的心肌細(xì)胞凋亡數(shù)高于同期假手術(shù)組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.心梗大鼠術(shù)后1～7d以心血瘀阻實(shí)證為主，28d左右表現(xiàn)為穩(wěn)定的心氣虛證，術(shù)后至28d為心梗大鼠由血瘀到氣虛轉(zhuǎn)變的重要時期，心氣虛貫穿整個過程并逐漸加重。冠脈結(jié)扎心梗大鼠不同時間段內(nèi)表現(xiàn)為不同的證候