肺炎克雷伯氏菌耐受碳青霉烯類藥物的調控機制.pdf

1、為研究肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）耐受碳青霉烯類藥物的調控機制，從外膜孔蛋白基因ompK35，ompK36以及編碼碳青霉烯酶的beta-內酰胺酶基因KPC-2的作用入手來探討耐藥性的變化。
　　主要過程和結果如下：
　　1．通過對同樣攜帶KPC-2基因的肺炎克雷伯氏菌的ompK35/K36基因測序，來檢測這些菌株之間的耐藥性差異是否和膜孔蛋白基因有關。結果發(fā)現了多種不同的ompK36序列型，臨

2、床分離菌株中造成細菌對于比阿培南（biapenem）耐藥性的主要基因突變是ompK36基因上第134-135的甘氨酸-天門冬氨酸出現重復（GD重復）。
　　2．通過實時PCR技術檢測菌株KPM1026和其突變體KPM1027中ompK35和ompK36的表達量差異，發(fā)現在KPM1026中ompK35和ompK36的表達比 KPM1027高。進一步實驗表明，KPM1027中的孔蛋白基因正向調控因子ramR基因出現移碼突變，從而導致o

3、mpK35基因的表達水平下降。
　　3．從攜帶KPC-2基因的菌株KP1004和KP1008以及不攜帶KPC-2基因的菌株KPM1026和KPM1027中篩選耐受比阿培南或美羅培南突變體，對這些突變體進行ompK35/36基因的序列分析，檢測美羅培南（meropenem）對于這些菌株的最低抑菌生長濃度（MIC），結果表明孔蛋白基因的突變會使菌株的耐藥性明顯增加。
　　4．選取不攜帶KPC-2基因的KPM1026和KPM102

4、7及其得到的ompK36基因的突變體KPM1171和KPM1176作為受體菌，攜帶KPC-2基因的菌株作為供體菌，進行細菌接合實驗。通過選擇美羅培南耐藥性將 KPC基因導入受體菌株。結果表明，ompK36基因上的單一突變大大增加受體菌株對于碳青霉烯類藥物的耐受性。5．將來自菌株KPM1026，KP1004和KP1064的ompK36基因克隆到表達載體 pRX，將重組質粒轉化菌株 KP1074，通過檢測對比阿培南的耐藥性，進一步表明含有或