攜帶blaNDM-1基因肺炎克雷伯菌對(duì)碳青霉烯類抗菌藥物耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目的：討攜帶NDM-1基因肺炎克雷伯菌耐藥機(jī)制、分子生物學(xué)特性和blaNDM基因的轉(zhuǎn)移和傳播機(jī)制。
　　方法：使用VITEK-32全自動(dòng)細(xì)菌分析儀進(jìn)行菌種鑒定，紙片擴(kuò)散法測(cè)定菌株對(duì)抗生藥物的敏感性，用E-test方法重新測(cè)定細(xì)菌對(duì)各類抗菌藥物的最低抑菌濃度(MIC)。改良Hodge試驗(yàn)進(jìn)行碳青霉烯酶表型的篩選;三維試驗(yàn)檢測(cè)AmpC酶;EDTA-Etest試紙條協(xié)同試驗(yàn)檢測(cè)金屬酶;用PCR擴(kuò)增TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-

2、M-9、KPC-1、KPC-2、GES、IMP-1、IMP-2、VIM-1、VIM-2、SPM-1、DHA、CMY、ompK35、ompK36和NDM-1基因，并對(duì)陽(yáng)性基因進(jìn)行測(cè)序分析確定其基因型;用脈沖場(chǎng)凝膠電泳和多位點(diǎn)序列分型分析細(xì)菌的同源性;質(zhì)粒接合試驗(yàn)和轉(zhuǎn)化試驗(yàn)驗(yàn)證NDM-1基因是否位于質(zhì)粒上。
　　結(jié)果：2011年1月-2012年6月共收集到27株耐碳青霉烯類抗生素的肺炎克雷伯菌，發(fā)現(xiàn)2株肺炎克雷伯菌攜帶有NDM-1基因

3、。其中肺炎克雷伯菌KP12還同時(shí)攜帶有SHV-1基因;肺炎克雷伯菌KP18同時(shí)攜帶有TEM-1、SHV-12和CTX-M-14基因，以及還攜帶有氨基糖苷類抗菌藥物16S rRNA甲基化酶armA基因。肺炎克雷伯菌KP12和KP18多位點(diǎn)序列分型分別為ST15和新序列型ST1031。脈沖場(chǎng)凝膠電泳顯示2株細(xì)菌為不同克隆型。接合試驗(yàn)顯示肺炎克雷伯菌KP12接合成功，而肺炎克雷伯菌KP18未接合成功。2株細(xì)菌耐藥質(zhì)粒經(jīng)轉(zhuǎn)化試驗(yàn)均成功轉(zhuǎn)入至大腸