基底剛度對(duì)創(chuàng)面愈合相關(guān)細(xì)胞的影響.pdf

1、在創(chuàng)面愈合階段，表皮細(xì)胞首先遷移至受創(chuàng)真皮，內(nèi)皮細(xì)胞形成新的血管，并用新生毛細(xì)血管交聯(lián)成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞代替由纖維蛋白基質(zhì)組成的肉芽組織。接著表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞開始增殖和成熟，并最終恢復(fù)上皮屏障功能。在創(chuàng)面愈合過程中，創(chuàng)面的剛度發(fā)生明顯的改變，而力學(xué)變化對(duì)細(xì)胞增殖、遷移和分化有著調(diào)控作用。因此，基底剛度的變化對(duì)創(chuàng)面愈合相關(guān)細(xì)胞的影響值得探討。本文采用人表皮細(xì)胞（HACAT）、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）和成纖維細(xì)胞三種創(chuàng)

2、面愈合相關(guān)細(xì)胞，以不同剛度的硅膠作為基底，將其接種在硅膠基底上，探索不同剛度基底對(duì)創(chuàng)面愈合相關(guān)細(xì)胞的影響，探索人表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞對(duì)外部力學(xué)刺激的應(yīng)激反應(yīng)，以期為闡明創(chuàng)面愈合機(jī)制，促進(jìn)創(chuàng)面愈合提供可靠的依據(jù)和參考意見。
　　本文主要的研究?jī)?nèi)容和結(jié)果為：
　?。?）了解創(chuàng)面愈合過程中剛度的變化，采用不同濃度的硅膠配制不同剛度的硅膠基底以模擬其愈合過程中的剛度變化，觀察硅膠基底表面形貌。結(jié)果顯示以16kPa、20kP

3、a、200kPa來分別模擬正常皮膚的剛度、創(chuàng)面愈合第7天肉芽組織的剛度、創(chuàng)面愈合后期的剛度。掃描電鏡觀察到不同濃度硅膠基底并未引起表面形貌的差別。
　?。?）將表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞接種在三種不同剛度的硅膠基底上。通過細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、MTT法和細(xì)胞周期檢測(cè)其增殖情況；用細(xì)胞劃痕法進(jìn)行表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞遷移率的測(cè)定。發(fā)現(xiàn)在剛度高的基底上表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增殖速度更快，且三種細(xì)胞的遷移率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于低剛度基底

4、上的細(xì)胞。同時(shí)發(fā)現(xiàn)表皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞對(duì)于基底剛度的變化敏感，而內(nèi)皮細(xì)胞雖然受基底剛度的影響，但其敏感程度不如表皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞。
　　（3）應(yīng)用構(gòu)建好的整合素β1小RNA干擾載體轉(zhuǎn)染表皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞，通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，用Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后表皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞整合素β1蛋白的改變。通過潮霉素持續(xù)加壓篩選已轉(zhuǎn)染細(xì)胞，直到轉(zhuǎn)染細(xì)胞株單克隆形成。通過蛋白質(zhì)印跡發(fā)現(xiàn)重組質(zhì)粒siIntegrinβ1轉(zhuǎn)染表皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞