伊布利特對(duì)兔左室中層細(xì)胞L-型鈣電流活性的影響.pdf

1、目的：心律失常至今仍是一種發(fā)病率和死亡率很高的疾病。積極探索心律失常的發(fā)生機(jī)制和尋求安全、高效的抗心律失常治療是當(dāng)今的研究熱點(diǎn)。伊布利特(Ibutilide)是一種新近推出的Ⅲ類抗心律失常藥物，對(duì)房性、室性心律失常的治療均有顯著效果，臨床應(yīng)用中在少數(shù)患者出現(xiàn)藥物性心律失常，最為嚴(yán)重的是尖端扭轉(zhuǎn)性室速(Tdp)。L-型鈣通道電流(ICa-L)是心肌細(xì)胞電活動(dòng)和機(jī)械活動(dòng)的重要離子流，生理情況下主要參與心室肌等快反應(yīng)細(xì)胞的動(dòng)作電位復(fù)極2相平臺(tái)

2、期的形成從而影響動(dòng)作電位時(shí)程和心肌的有效不應(yīng)期。本研究利用Langendorff灌流裝置，采用酶解法分離兔單個(gè)左室前壁中層心肌細(xì)胞(M細(xì)胞)，分別配制伊布利特終濃度為10-5mol/L和10-6mol/L的細(xì)胞外液灌流細(xì)胞，應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄方法，以觀察正常心室肌L-型鈣通道電流(ICa-L)活性的變化，從細(xì)胞水平探討伊布利特抗心律失常的離子機(jī)制及出現(xiàn)藥物性心律失常的電生理基礎(chǔ)。 材料與方法: 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：新西蘭純種

3、大耳白兔40只，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄不拘，體重2.0～2.5kg。 2.細(xì)胞分離：猝擊兔頭顱枕部致昏，迅速開胸切取心臟，置于冰冷的無鈣臺(tái)氏液中，剪去心包，心臟經(jīng)修飾后連接在Langendorff心臟灌流裝置上，經(jīng)主動(dòng)脈根部逆行用無鈣臺(tái)氏液和0.4mg/ml膠原酶液灌流，準(zhǔn)確分離剪碎左心室前壁中層心肌細(xì)胞，定位方法：用眼科剪分別剪去左室心內(nèi)膜下＜1.5mm和心外膜下＜1.5mm的組織，剩余中間部分以外科手術(shù)刀片刮除

4、殘余心內(nèi)膜和外膜細(xì)胞后為中層細(xì)胞，用0.2mg/ml膠原酶液孵化細(xì)胞，同時(shí)充100％O2，分離出較多的紋理清晰長(zhǎng)方形的細(xì)胞后放在存儲(chǔ)液內(nèi)保存。1～2小時(shí)后以CaCl2溶液分3次復(fù)鈣使細(xì)胞外液鈣離子濃度至1.8mmol/L，即可備用。 3.藥物：伊布利特純品由北京紅惠生物制藥股份有限公司贊助，膠原酶、HEPES、去脂肪酸的牛血清蛋白(BSA)等由Sigma公司生產(chǎn)，余為國(guó)產(chǎn)分析純。膠原酶、BSA、ATP-Na2保存在4℃冰箱。伊布

5、利特液：伊布利特10mg(相當(dāng)于伊布利特8.7mg)，三水醋酸鈉18.9mg，氯化鈉890mg，用鹽酸調(diào)整PH約4.6和注射用水適量加至100ml。 4.電流記錄：應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄方法，記錄10-6mol/L及10-5mol/L伊布利特外液對(duì)正常左室前壁中層細(xì)胞鈣電流活性的變化，與正常對(duì)照組進(jìn)行比較、分析。電流記錄的刺激程序由pulse+pulsefit軟件控制，通道信號(hào)經(jīng)EPC-9膜片鉗放大器放大，通過Ag-AgCl電極絲

6、和填充電極內(nèi)液的微電極導(dǎo)入細(xì)胞，產(chǎn)生的電流信號(hào)經(jīng)EPC-9轉(zhuǎn)換，為pulse+pulsefit軟件收集、分析。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：以單個(gè)細(xì)胞作為統(tǒng)計(jì)單位，應(yīng)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，首先進(jìn)行組間均衡性檢驗(yàn)，兩組計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，成組資料間比較采用方差分析，以P＜0.05為有顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)論: 1.本研究觀察了兔正常左室前壁中層心肌細(xì)胞ICa-L電流在不

7、同濃度伊布利特灌流后的變化，包括激活、失活、失活后再恢復(fù)，并與CON組心室肌細(xì)胞進(jìn)行了對(duì)比分析。 2.伊布利特呈濃度依賴性的促進(jìn)ICa-L電流，包括Ⅰ-Ⅴ曲線下移，ICa-L電流密度增大，失活曲線右移，失活后再恢復(fù)增快，提示兔正常左室前壁中層心肌細(xì)胞的L-型鈣通道活性在伊布利特作用后受到促進(jìn)。但I(xiàn)Ca-L電壓依賴性不變，對(duì)激活電位、峰值電位、反轉(zhuǎn)電位及Ⅰ-Ⅴ曲線的形態(tài)軌跡均無影響。與伊布利特治療臨床上常見的由于由于鈣電流抑制引起