逍遙散對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)原代細(xì)胞L-型-鈣離子通道快速作用機(jī)制的影響.pdf

1、研究目的：
　　總結(jié)研究逍遙散治療郁病相關(guān)疾病的機(jī)制，在逍遙散抗慢性應(yīng)激損傷的基礎(chǔ)上展開相關(guān)實(shí)驗(yàn)，來明確慢性應(yīng)激損傷的機(jī)制或探求慢性應(yīng)激損傷可能存在的一些中樞機(jī)制。
　　研究方法：
　　SPF級(jí) Wistar雄性大鼠27只，體重180g-230g，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、慢性應(yīng)激模型組、逍遙散治療組3組，每組9只大鼠，參考 Cart的（多相性）應(yīng)激模型方法，用五種應(yīng)激源給與刺激，刺激方法包括：足底電擊、冰水游泳、禁水、禁食

2、和束縛。為避免大鼠適應(yīng)，相鄰兩天不能出現(xiàn)重復(fù)，使其無規(guī)律性，并且每天刺激安排不定時(shí)隨機(jī)，連續(xù)刺激21天。于最后給藥刺激2h左右后股動(dòng)脈取血，血液離心、分離血清、滅活并標(biāo)記。無菌條件0.22um抽濾除菌后lml分裝保存。
　　取 Wistar乳鼠海馬神經(jīng)元代細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、正常模型血清組、慢性應(yīng)激模型血清組、逍遙散治療模型血清組、慢性應(yīng)激模型組血清+MK-801組、逍遙散治療模型血清+MK-801組、慢性應(yīng)激模型組血清+N

3、ifedipine組、逍遙散治療模型組血清+Nifedipine組、慢性應(yīng)激模型組血清+MK-801+Nifedipine組、逍遙散治療模型組血清+MK-801+Nifedipine組十個(gè)組?？瞻讓?duì)照組細(xì)胞指標(biāo)變化，非單一因素的，先加入工具藥，再加入相應(yīng)的干預(yù)血清，研究其對(duì) Wistar乳鼠影響海馬細(xì)胞的表達(dá)，并致力于發(fā)掘祖國傳統(tǒng)中藥逍遙散對(duì)慢性應(yīng)激損傷和機(jī)制可能存在的作用。
　　以免疫熒光方法檢測(cè)細(xì)胞純度；用MTT方法檢測(cè)元代細(xì)

4、胞存活率；用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)游離鈣離子濃度。
　　研究結(jié)果：
　　1、培養(yǎng)7天，乳鼠神經(jīng)元代細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，胞體清晰，純度最高可達(dá)83.71％，平均為76.32%。
　　2、各組神經(jīng)元代細(xì)胞內(nèi)鈣離子變化有明顯差異。第（1）組空白對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)鈣離子表達(dá)為標(biāo)準(zhǔn)，第（2）組（正常模型血清組）組與第（1）組（空白模型血清對(duì)照組）細(xì)胞內(nèi)鈣離子表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其他各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；第（3）組（正常模型血清組）鈣離子表達(dá)下

5、調(diào)不明顯；第（4）組（慢性應(yīng)激模型血清組）細(xì)胞內(nèi)鈣離子表達(dá)明顯上調(diào)；第（5）組（逍遙散治療模型血清組）細(xì)胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流升高，但明顯低于第（4）組；其他各組鈣離子內(nèi)流表達(dá)低于第（1）組，第(9)組(慢性應(yīng)激模型組血清+MK-801+Nifedipine組)與第(10)組(逍遙散治療模型組血清+MK-801+Nifedipine)細(xì)胞內(nèi)鈣離子表達(dá)明顯下調(diào)。
　　研究結(jié)論：
　　中藥逍遙散抗慢性應(yīng)激損傷可能從多種信號(hào)途徑起作用，如