ID4基因甲基化特異性定量PCR方法的建立及其在急性白血病微小殘存病檢測中的意義.pdf

1、軍醫(yī)進修學院解放軍總醫(yī)院碩士學位論文ID4基因甲基化特異性定量PCR方法的建立及其在急性白血病微小殘存病檢測中的意義姓名：劉洋申請學位級別：碩士專業(yè)：血液內(nèi)科指導教師：于力20090520軍醫(yī)進修學院碩士學位論文陰性以及空白對照；成功構建了目標片段和內(nèi)參擴增片段的質(zhì)粒；制作目標片段和內(nèi)參的標準曲線；選擇適合的定量分析方法。并驗證該方法的特異性和敏感性，結果證明：l、17例正常骨髓ID4甲基化均為陰性，45例初治急性白血病骨髓樣本甲基化陽

2、性率為778％，其中AML為727％，ALL為792％，方法具有良好的特異性。2、將甲基化陰性和陽性細胞系按不同比例混合，該方法最低可以檢測到1：105中的ID4甲基化陽性細胞，證明敏感性高。第三，在方法建立的基礎上，初步嘗試檢測急性白血病骨髓樣本：1、甲基化陽性率中，正常骨髓標本均為0，初治組為75％，復發(fā)、未緩解組為100％。結果提示：在急性白血病細胞中耐藥、難治的克隆甲基化陽性率高；易復發(fā)、難治的亞型甲基化陽性率呈增高的趨勢。2、

3、PMR(percentageofmethylatedreference)值代表甲基化定量水平，正常組均為0與忠病組有顯著差異(p0oo)；在不同疾病狀態(tài)下(初治、完全緩解、復發(fā)、未緩解)初治組與完全緩解組PMR值有統(tǒng)計學差異(p=0031005)。PMR值似乎與腫瘤在體內(nèi)的負荷有關。初治時個體間PMR值差異較大。3、系列樣本的研究發(fā)現(xiàn)：持續(xù)緩解狀態(tài)時，PMR值一直保持在極低的水平；復發(fā)時PMR伴隨腫瘤細胞數(shù)量增加而增加，PMR值與急性白

4、血病腫瘤負荷有顯著的相關性；有提前預測形態(tài)學復發(fā)的可能；與其他遺傳學微殘指標變化趨勢相同，可檢測到急性白血病分子復發(fā)?？傊?，本研究成功建立了ID4甲基化特異性定量PCR的體系和方法。同時通過臨床樣本證明：ID4基因啟動子區(qū)的甲基化在各急性白血病亞型中具有覆蓋率廣；該方法特異性好，敏感性高；甲基化水平的量化指標PMR值，可以反映急性白血病患者腫瘤細胞負荷變化；不同克隆的白血病細胞間存在差異；動態(tài)監(jiān)測具有提示復發(fā)的作用，具備成為新的MRD檢