半巢氏甲基化特異性PCR在急性白血病患者p15基因甲基化檢測中的應(yīng)用及甲基化逆轉(zhuǎn)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：旨在應(yīng)用半巢氏甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(Hemi-nested methylation specific PCR，Hn-MSP)檢測急性白血病患者p15基因甲基化狀態(tài)，探討p15基因甲基化或缺失與白血病發(fā)生、發(fā)展可能的關(guān)系；探討VPA單藥和與AS<,2>O<,3>聯(lián)合對急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞株細(xì)胞的增殖抑制作用以及VPA是否有去甲基化作用或協(xié)同AS<,2>O<,3>的甲基化逆轉(zhuǎn)作用，從而誘導(dǎo)沉默基因重新表達(dá)。 方法：采用半巢

2、氏甲基特異性聚合酶鏈反應(yīng)和基因組硫化后直接測序(Bisulfit-sequencing PCR，BSP)檢測急性白血病患者和部分惡性血液病細(xì)胞株p15基因甲基化狀態(tài)，并分析Hn-MSP的敏感性和特異性；生長曲線、MTT法檢測VPA和AS<,2>O<,3>對細(xì)胞的生長和增殖抑制，并應(yīng)用金正均的Q值公式探討兩藥聯(lián)合是協(xié)同作用還是拮抗作用；利用流式細(xì)胞儀DNA含量分析法探討VPA對細(xì)胞周期的影響。RT-PCR檢測急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞株經(jīng)不同藥

3、物處理前后p15、甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT-1)、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表達(dá)變化；Hn-MSP觀察用藥前后甲基化水平的變化等。 結(jié)論： 1)半巢氏MSP方法檢測基因甲基化狀態(tài)靈敏度高、特異性強(qiáng)，值得在臨床應(yīng)用。 2)p15基因甲基化狀態(tài)在急性白血病患者，尤其是復(fù)發(fā)病人，有較高的檢出率，而正常人較少發(fā)生甲基化，p15基因甲基化可作為AL病程進(jìn)展、復(fù)發(fā)、預(yù)后的指標(biāo)之一。 3)VPA可能通過降低