微小殘留白血病監(jiān)測(cè)的研究——FQ-PCR檢測(cè)白血病融合基因：細(xì)胞水平的研究及初步臨床觀察.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文微小殘留白血病監(jiān)測(cè)的研究——FQPCR檢測(cè)白血病融合基因：細(xì)胞水平的研究及初步臨床觀察姓名：梁潔芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：葉鐵真20090522微小殘留白m病監(jiān)測(cè)的研究一一FQPCR檢測(cè)白血病融合基W：細(xì)胞水平的研究及初步臨床觀察中文摘要chainreaction，PCR)等，不同方法各有利弊。核型分析、FISH和FCM等的敏感性分別為lo1～10～、10。210。3和lO一～104，難以滿足對(duì)MR

2、D診斷的需要，且都存在或操作費(fèi)時(shí)，或費(fèi)用較高，或?qū)颖疽筝^高等不足之處。FQPCR(fluorescentquantitativePCR，F(xiàn)Q—PCR)足在PCR基礎(chǔ)上發(fā)展的核酸分子定量技術(shù)，該技術(shù)以Ig／TCR重排、染色體易位斷裂融合區(qū)為標(biāo)志，結(jié)合探針和引物的合理搭配，利用熒光信號(hào)的變化，實(shí)時(shí)檢鋇iJPCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，通過(guò)循環(huán)閡值(cyclethreshold，Ct)和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析，

3、具有敏感度高、準(zhǔn)確定量、簡(jiǎn)便快速，污染較少等優(yōu)點(diǎn)，是目前最為理想的MRD定量檢測(cè)方法。檢測(cè)白血病MRD的靶標(biāo)志之一融合基因足由于染色體結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致的分子水平的異常，目前已發(fā)現(xiàn)超過(guò)50種與白血病有關(guān)的融合基因異常，這些異常已成為不同類型自血病的分子牛物學(xué)特異性標(biāo)志，可作為臨床上對(duì)自血病進(jìn)行分型、頇后判斷和殘留病追蹤的依據(jù)。由歐洲10個(gè)國(guó)家26個(gè)實(shí)驗(yàn)室共同參與研究制定的“歐洲防癌計(jì)劃”(EuropeAgainstCancerprogram，

4、EAC)，通過(guò)以FQ—PCR方法檢測(cè)9種主要的白血病特異融合基因，建立了一套標(biāo)準(zhǔn)化的MRD定量檢測(cè)方法，并初步評(píng)價(jià)該方法的敏感度、特異性和重復(fù)性，為大規(guī)模的臨床實(shí)驗(yàn)研究建立了方法學(xué)基礎(chǔ)。該標(biāo)準(zhǔn)化方法在兒童及成人ALL及AML中的檢出率達(dá)30％40％，在CML中超過(guò)95％。盡管以FQPCR檢測(cè)白血病融合基因已應(yīng)用于臨床，但仍存在下列問(wèn)題：①對(duì)一項(xiàng)檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)，應(yīng)在嚴(yán)格的質(zhì)量控制的前提下，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行真實(shí)性(包括敏感性、特異性和約登指數(shù)

5、)和可靠性(主要以變異系數(shù)表示)等方面的評(píng)價(jià)，而目前的文獻(xiàn)中，僅見(jiàn)對(duì)FQ—PCR檢測(cè)自血病融合基因的檢測(cè)方法進(jìn)行敏感性、特異性和可靠性的評(píng)價(jià)，而未見(jiàn)質(zhì)量控制等方面的報(bào)道；②在引物、探針、內(nèi)參基因的選擇等技術(shù)問(wèn)題上尚未達(dá)成一致；③目前國(guó)際上尚未統(tǒng)一各種白血病融合基因的表達(dá)水平與臨床分級(jí)和預(yù)后的關(guān)系。我們通過(guò)前期研究，已分別構(gòu)建了含BCRABLMbcr、BCRABLm—bcr、BCRABL∥一bcr、PML—RARa、AMLl一ETO、TE