解毒復(fù)腎逐瘀方對(duì)腎纖維化作用研究.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化（RIF）是各種慢性腎病進(jìn)展至終末期腎病的共同途徑，積極防治腎纖維化對(duì)慢性腎病的防治具有重要意義。腎小管上皮細(xì)胞在腎間質(zhì)纖維化過(guò)程發(fā)揮重要作用。小管間質(zhì)病變是決定慢性腎功能不全進(jìn)程的主要因素，其發(fā)生發(fā)展機(jī)制復(fù)雜。解毒復(fù)腎逐淤方是福建省立醫(yī)院中醫(yī)科在長(zhǎng)期臨床實(shí)踐中總結(jié)的一個(gè)治療慢性腎病的有效方劑，并取得了良好效果。本研究的目的在于探討該方對(duì)腎間質(zhì)纖維化的作用及可能機(jī)制，為臨床方劑的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，為臨床腎間質(zhì)纖維化治

2、療提供新的思路和依據(jù)。
　　方法：構(gòu)建轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞纖維化模型，運(yùn)用MTT、WesternBlot和流式細(xì)胞檢測(cè)等方法，觀察解毒復(fù)腎逐淤方對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)的變化及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響，從細(xì)胞水平揭示該方劑的作用及可能的機(jī)制。運(yùn)用大鼠單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型（UUO）在整體動(dòng)物水平上觀察藥物的作用并對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)得出的藥物可能的作用機(jī)制進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，以TGF

3、-β1為直接刺激因子，與HK-2細(xì)胞共同培養(yǎng)3d后，可見(jiàn)部分細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變，變得肥大、拉長(zhǎng)成梭形似肌成纖維細(xì)胞形態(tài)，且大量的HK-2細(xì)胞表達(dá)α-SMA，Ⅲ型膠原分泌增加，CTGF表達(dá)也顯著增加。解毒復(fù)腎逐淤方可明顯抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，多數(shù)細(xì)胞維持了正常的上皮細(xì)胞形態(tài)，α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)也減少，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。各劑量的藥物干預(yù)組Ⅲ型膠原含量均低于TGF-β1誘導(dǎo)組，且具有劑量依賴效應(yīng)。同時(shí)，干預(yù)組藥

4、物可明顯降低TGF-β1誘導(dǎo)的CTGF表達(dá)，推測(cè)抑制CTGF表達(dá)可能是其阻斷TGF-β1誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)分化的作用靶點(diǎn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，解毒復(fù)腎逐淤方能顯著降低UUO模型大鼠的腎間質(zhì)纖維化水平。病理組織學(xué)及免疫組化檢測(cè)表明這一對(duì)腎纖維化的抑制作用與該方劑調(diào)控MMP-2、MMP-9及TIMP之間的平衡，并能抑制CTGF的表達(dá)有關(guān)。
　　結(jié)論:解毒復(fù)腎逐淤方能減輕腎間質(zhì)纖維化的損傷，可能與調(diào)控TGF-β-CTGF信號(hào)通路有關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)