滋腎活血方對(duì)腎纖維化模型大鼠Smad-TGF-β1傳導(dǎo)通路干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)觀察在抗腎纖維化的進(jìn)程中滋腎活血方對(duì)慢性腎纖維化模型大鼠Smad蛋白、TGF-β1表達(dá)水平的影響，初步證實(shí)滋腎活血方對(duì)Smad蛋白表達(dá)干預(yù)作用可抑制TGF-β1水平表達(dá)，探討Smad2/3、Smad4、Smad7蛋白、TGF-β1在腎纖維化進(jìn)程中四者之間相關(guān)數(shù)值變化的規(guī)律。進(jìn)一步闡明TGF-β1/Smad信號(hào)傳導(dǎo)通路在腎纖維化進(jìn)程中的作用并為其提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:預(yù)實(shí)驗(yàn)共用體重為200±20g的雌雄各半wist

2、er大白鼠8只探索造模，分別于第2、4、6、8周末隨機(jī)抽取大鼠2只處死取血并摘取腎臟稱重，處死前1d，所有大鼠置于代謝籠中收集24h尿液。行BUN、Scr、ALB、24h尿蛋白測(cè)定、腎臟病理學(xué)檢查。出現(xiàn)節(jié)段甚至球性腎小球硬化、球囊粘連、腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、腎間質(zhì)纖維化及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變則提示造模成功，預(yù)實(shí)驗(yàn)完成。正式實(shí)驗(yàn)亦選取體重為200±20g的雌雄各半wister大白鼠60只按預(yù)實(shí)驗(yàn)造模方法行單側(cè)腎臟切除術(shù)，隨機(jī)分為病理模

3、型組（模型組）12只、滋腎活血顆粒組（中藥組）12只、卡托普利對(duì)照組（西藥組）12只。隨機(jī)抽取12只行腹腔切開后逐層縫合即為假手術(shù)組，剩余未行手術(shù)的12只為空白對(duì)照組（空白組）。
　　 單側(cè)腎臟切除術(shù)后第7天，模型組、中藥組、西藥組的大鼠一次性從尾靜脈注射阿霉素注射液(5mg/kg)，單側(cè)腎臟切除術(shù)后第14天以上各組大鼠再一次性從尾靜脈注射阿霉素注射液(3mg/kg)，假手術(shù)組則每次注射生理鹽水1～3ml，空白對(duì)照組不做處理.中

4、藥組在第二次注射阿霉素后第二天，開始予滋腎活血顆粒懸濁液10ml/kg/日灌胃，西藥組在第二次注射阿霉素后第二天，開始予卡托普利液10ml/kg/日灌胃。手術(shù)組、模型組同時(shí)均予0.9％生理鹽水10ml/kg/日灌胃，四組大鼠給藥方法和方式相同，所有動(dòng)物均自由飲水和進(jìn)食?？瞻捉M不予處理，亦自由飲水和進(jìn)食。療程均為8周，實(shí)驗(yàn)全過(guò)程共11周(含適應(yīng)性飼養(yǎng)1周）。第11周末處死大鼠取血并摘取腎臟，處死前1d，所有大鼠置于代謝籠中收集24h尿液行

5、24h尿蛋白測(cè)定。將所取腎臟進(jìn)行組織病理切片、染色及TGF-β1、Smad2/3、Smad4、Smad7免疫組化檢測(cè)。從腹腔靜脈行BUN、Scr、ALB等一般生化檢測(cè)。
　　 結(jié)果:中藥組、西藥組血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿蛋白顯著降低;病理結(jié)果中藥組顯著改善球囊粘連、狹窄等現(xiàn)象，并對(duì)基底膜有明顯的恢復(fù)作用。西藥組對(duì)病理改變無(wú)顯著作用。中藥組腎小球內(nèi)TGF-β1、Smad2/3、Smad4，蛋白表達(dá)均明顯低于模型組，而