膿毒癥脾細(xì)胞損傷機(jī)制的探討及丹參保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：復(fù)制膿毒癥大鼠模型，動(dòng)態(tài)觀察膿毒癥對(duì)脾組織細(xì)胞的影響；觀察腫瘤壞死因子(TNF-a)和氧自由基(OFR)含量的變化對(duì)脾細(xì)胞凋亡的影響，以探討膿毒癥脾細(xì)胞凋亡的機(jī)制；觀察中藥丹參對(duì)此過(guò)程的干預(yù)作用，以期為膿毒癥的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：選用體重180-250g的雄性Wistar大鼠96只，隨機(jī)分為對(duì)照組(control group，Control)、假手術(shù)組(sham operated group，Sham)、模型組(

2、cecal ligation and puncture group，CLP)和丹參干預(yù)組(Salvia miltiorrhizatreated group，Salvia)，每組24只。每組又分6h、12h、24h和48h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每時(shí)間點(diǎn)6只。Control組動(dòng)物僅給3﹪戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔麻醉；Shma組僅行盲腸翻動(dòng)，不行結(jié)扎和穿刺；CLP組行盲腸結(jié)扎后用20號(hào)針貫穿盲腸3次制成膿毒癥模型；Salvia組于行CLP后腹腔注射

3、丹參注射液10g(1.0g/ml)。每組動(dòng)物均于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)麻醉活殺，腹主動(dòng)脈取血，用于檢測(cè)血清中TNF-a、MDA水平變化及GXH-Px活力測(cè)定。同時(shí)取其脾臟，分別用于脾組織勻漿的制備和病理組織學(xué)檢查。采用雙抗夾心ABC-ELISA法測(cè)定TNF-a，采用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA、采用DTNB直接法測(cè)定GSH-Px、采用終末脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的原位缺口末端標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase

4、-mediateddUTP nick end labeling，TUNEL)技術(shù)檢測(cè)脾細(xì)胞凋亡情況。采用多元性回歸分析篩選影響脾細(xì)胞凋亡的因素。 結(jié)果：(1)膿毒癥模型的確認(rèn)：CLP組腹腔炎癥的嚴(yán)重程度與時(shí)間呈依賴(lài)關(guān)系，腹腔炎癥在48h達(dá)到高峰，腹腔內(nèi)有大量膿性或血性滲出液，而Control組與Sham組腹腔無(wú)明顯的炎癥過(guò)程。 (2)血清和脾組織TNF-a的變化與Control組相比，Sham組TNF-a水平在各時(shí)間點(diǎn)均

5、增高(p<0.01)，并且在12時(shí)間點(diǎn)達(dá)到峰值，其后逐漸下降。CLP組與Sham組相比，血清TNF-a水平在6h升高，于24h達(dá)到峰值。Salvia組也在6h升高，但峰值滯后于CLP組，于48h達(dá)到其峰值，并在24h顯著低于CLP組(p<0.01)。 (3)血清和脾組織MDA的變化 Control 組和Sham組MDA水平未見(jiàn)明顯差異，與Sham組相比，CLP組在6h時(shí)間點(diǎn)明顯增高，于48h達(dá)到峰值。Salvia組血清MDA增高

6、滯后于CLP組，在12h后開(kāi)始增高，在48h達(dá)到峰值，并在12h和24h分別顯著低于同時(shí)間點(diǎn)CLP組(p<0.01)。 (4)血清脾組織GSH-Px的變化Control組和Sham組血清GSH-Px未見(jiàn)明顯變化，與Sham組相比，CLP組在6h降低，48h達(dá)到最低值。Salvia組GSH-Px降低滯后于CLP組，在12h后降低，也在48h達(dá)其最低值，水平接近于CLP組。Salvia組血清GSH-Px在6h、12h和24h三個(gè)時(shí)間

7、點(diǎn)顯著高于CLP組，(p<0.01)。 (5)脾細(xì)胞凋亡的變化CLP組在6h時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性率增加，在24h達(dá)到高峰，在48h時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性率減少。Salvia組在6h陽(yáng)性率開(kāi)始增高，24h達(dá)到高峰，但其陽(yáng)性率在12h和24h低于同時(shí)間點(diǎn)CLP組(P<0.01)。 (6)多元性回歸分析結(jié)果：影響膿毒癥大鼠脾細(xì)胞的凋亡的因素是血清MDA,脾組織MDA，脾組織TNF-a和脾組織GSH-Px。 結(jié)論：1．予Wistar大鼠施盲腸