miR-132在膿毒癥肺損傷小鼠中的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　觀察膿毒癥肺損傷小鼠肺組織中miR-132的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化以及肺內(nèi)上調(diào)miR-132的表達(dá)后對(duì)膽堿酯酶及炎癥反應(yīng)的影響，探討miR-132對(duì)膿毒癥肺損傷小鼠的肺保護(hù)作用及機(jī)制。
　　方法：
　　1.選擇雄性健康SPF級(jí)BABL/c小鼠；采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）構(gòu)建小鼠膿毒癥肺損傷模型，模型構(gòu)建成功后，病理切片檢測(cè)肺損傷程度；ELISA檢測(cè)肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥因子的表

2、達(dá)變化；計(jì)算肺濕干重比值；用RT-qPCR檢測(cè)肺組織中miR-132的表達(dá)變化；用Western blot檢測(cè)肺組織AchE蛋白含量變化；T-CHE試劑盒檢測(cè)BALF中AchE活性。
　　2.選擇氣管內(nèi)滴入in vivo-jetPEITM介導(dǎo)的miR-132，轉(zhuǎn)染成功后采用CLP構(gòu)建膿毒癥肺損傷模型，造模24小時(shí)后處死小鼠。留取左肺行肺泡灌洗，用ELISA檢測(cè)BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥因子的表達(dá)變化；留取右肺，

3、病理切片觀察肺損傷程度，稱量、烘干，計(jì)算濕干重比值，用RT-qPCR檢測(cè)肺組織中miR-132的表達(dá)變化，用Western blot檢測(cè)肺組織AchE蛋白含量變化，T-CHE試劑盒檢測(cè)BALF中AchE活性。
　　結(jié)果：
　　1. CLP能夠成功構(gòu)建膿毒癥肺損傷模型，病理結(jié)果顯示造模6 h小鼠開(kāi)始出現(xiàn)肺損傷，損傷程度隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸加重，24 h小鼠肺損傷最嚴(yán)重；肺濕干重比值在CLP術(shù)后6 h開(kāi)始增加，肺水腫逐漸加重，24

4、h肺水腫最嚴(yán)重，隨后肺水腫逐漸減輕；BALF中炎癥因子表達(dá)量在CLP術(shù)后逐漸增加，TNF-α表達(dá)于12 h、24 h達(dá)高峰，IL-1β、IL-6于24 h達(dá)高峰，48 h后均開(kāi)始逐漸下降。
　　2.膿毒癥會(huì)誘導(dǎo)肺組織miR-132表達(dá)上調(diào)，CLP術(shù)后6 h開(kāi)始，miR-132的表達(dá)量逐漸升高，12 h、24 h達(dá)高峰（13.27±1.21倍、14.31±1.24倍），48 h開(kāi)始下降。
　　3.經(jīng)氣道內(nèi)滴入in vivo-j

5、etPEITM介導(dǎo)的miR-132能夠成功上調(diào)肺內(nèi)的miR-132的表達(dá)，轉(zhuǎn)染后24 h表達(dá)達(dá)高峰；病理結(jié)果示轉(zhuǎn)染組膿毒癥小鼠肺損傷程度較假轉(zhuǎn)染組減輕；肺組織水腫減輕；BALF中炎癥因子表達(dá)下降，上調(diào)肺內(nèi)miR-132能夠降低膿毒癥肺損傷小鼠的肺部炎癥反應(yīng)。
　　4.膿毒癥肺損傷模型構(gòu)建成功后發(fā)現(xiàn)肺組織中AchE表達(dá)隨CLP術(shù)后時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增加，BALF中AchE活性亦增加；上調(diào)肺內(nèi)miR-132后肺組織中AchE蛋白表達(dá)及BA