miR-132上調(diào)肺泡巨噬細(xì)胞膽堿能抗炎通路的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　觀察miR-132是否可增強(qiáng)ACh對(duì)LPS誘導(dǎo)的AM炎癥反應(yīng)的抑制作用，探討miR-132調(diào)控AM炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)AM，分別予LPS、LPS+ACh、LPS+ACh+Phy處理；向AM轉(zhuǎn)染miR-132mimic或inhibitor，分別予LPS、LPS+ACh處理；采用ELISA檢測(cè)AM上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量，采用RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞中miR-132、

2、AChE的表達(dá)，采用AChE活性試劑盒檢測(cè)AM上清液中AChE的活性，采用WesternBlot檢測(cè)AChE、NF-κBp65、STAT3、p-STAT3的表達(dá)，采用免疫熒光檢測(cè)NF-κBp65的核移位情況。
　　結(jié)果：
　　1.LPS刺激AM后3h、6h、12h、24h，TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均較對(duì)照組逐漸升高；LPS刺激后6h，miR-132的表達(dá)開始逐步上調(diào)；LPS刺激后12h，AChEmRNA、蛋白及

3、活性水平均較對(duì)照組升高，LPS刺激后24h，AChEmRNA較前無明顯變化，AChE蛋白及活性降低。
　　2.0.01μM、0.1μM、1μM的ACh對(duì)LPS誘導(dǎo)的TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌作用均較小，10μM及100μM的ACh則顯著降低了上清液中炎癥因子的水平；予Phy處理后顯著增強(qiáng)ACh的抗炎作用。
　　3.單獨(dú)轉(zhuǎn)染miR-132mimic或miR-132inhibitor并不影響LPS誘導(dǎo)的AM炎癥反應(yīng)，

4、當(dāng)加入ACh預(yù)處理后，過表達(dá)miR-132可增強(qiáng)ACh對(duì)LPS誘導(dǎo)AM的抗炎作用，抑制miR-132活性可減弱ACh對(duì)LPS誘導(dǎo)AM的抗炎作用。
　　4.轉(zhuǎn)染miR-132mimic或inhibitor，AChEmRNA的水平無明顯變化，miR-132mimic可抑制AChE蛋白及活性水平，miR-132inhibitor可增加AChE蛋白及活性水平；miR-132增強(qiáng)ACh對(duì)LPS誘導(dǎo)AM的NF-κB核移位抑制作用；miR-13