miR-155對小鼠膿毒癥急性肺損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過建立膿毒癥急性肺損傷（ALI）小鼠模型，觀察膿毒癥小鼠肺組織內(nèi)miR-155表達(dá)變化，探討其對膿毒癥ALI的影響及機(jī)制。
　　方法：
　　1.盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）構(gòu)建膿毒癥ALI小鼠模型。實(shí)驗(yàn)分兩組：假手術(shù)對照組（Sham組）和手術(shù)組（CLP組）；分別于術(shù)后0h、6h、12h、24h、48h取肺泡灌洗液（BALF）和肺組織標(biāo)本。
　　2.SPF級(jí)BALB/c小鼠經(jīng)氣管內(nèi)滴入miR-155ago

2、mir轉(zhuǎn)染復(fù)合物，轉(zhuǎn)染后6h、12h、24h、36h、72h收集肺組織標(biāo)本，對照組滴入PBS、NegtiveControl(NC)；體內(nèi)轉(zhuǎn)染miR-155后1h進(jìn)行CLP術(shù)，術(shù)后24h收集BALF和肺組織標(biāo)本。
　　3．分別在光鏡下觀察小鼠肺組織病理改變；計(jì)算肺組織濕干重比值（W/D）；采用ELISA檢測BALF中TNF-α、IL-1β水平，RT-qPCR檢測肺組織miR-155表達(dá)，westernblot檢測肺組織Caspase

3、-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、TAB2表達(dá)，電鏡下觀察自噬小體數(shù)量。
　　結(jié)果：
　　1.光鏡下觀察到Sham組肺泡結(jié)構(gòu)正常，CLP組肺泡結(jié)構(gòu)紊亂、消失，肺泡間隔增厚、斷裂，肺泡內(nèi)可見大量炎癥細(xì)胞浸潤及出血；與Sham組比較，肺組織W/D、Caspase-1表達(dá)和BALF中TNF-α、IL-1β水平均隨著CLP時(shí)間的延長逐漸增加，24h達(dá)到高峰（5.59±0.54vs4.03±0.18、2.15±0.30vs0.93±0.13和236

4、7.35±624.35pg/mlvs131.89±40.84pg/ml，152.97±52.27pg/mlvs64.33±20.54pg/ml）；miR-155從CLP術(shù)后6h開始時(shí)升高，24h達(dá)到高峰（15.66±2.06vs1.00±0.00）；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明CLP術(shù)后24h成功構(gòu)建小鼠膿毒癥ALI模型，且miR-155在膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)表達(dá)上調(diào)。
　　2.轉(zhuǎn)染miR-155agomir復(fù)合物24

5、h后肺組織勻漿中miR-155表達(dá)倍數(shù)升高至（49.51±8.92）倍，miR-155在體內(nèi)可穩(wěn)定表達(dá)36h；在膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)，轉(zhuǎn)染miR-155后，與NC組比較，光鏡下觀察到肺泡間隔增厚減輕、炎癥細(xì)胞浸潤減少，肺組織W/D及BALF中TNF-α、IL-1β水平均明顯下降（5.03±0.15vs5.62±0.52和783.53±229.11pg/mlvs2029.95±766.80pg/ml，109.13±13.10pg/mlvs

6、209.85±50.06pg/ml），肺組織中Caspase-1表達(dá)下調(diào)（1.03±0.06vs0.48±0.26）；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明過表達(dá)miR-155能夠減輕膿毒癥ALI肺內(nèi)炎癥反應(yīng)。
　　3.在膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)，LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)增加（2.6±0.20vs0.95±0.12），電鏡下觀察到自噬小體增加（4.8±0.84vs1.0±0.70）；轉(zhuǎn)染miR-155后，在膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)TAB2表達(dá)下

7、調(diào)（0.51±0.07vs1.11±0.13）、LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)增加（1.89±0.15vs1.00±0.07），自噬小體數(shù)量增加（8.50±0.76vs3.33±0.42）；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明miR-155可能通過靶向TAB2上調(diào)膿毒癥ALI小鼠肺內(nèi)自噬。
　　結(jié)論：
　　膿毒癥ALI小鼠肺組織中miR-155表達(dá)增加，miR-155可能通過靶向TAB2蛋白，上調(diào)自噬，抑制Caspase-1的表達(dá)，減