膿毒癥大鼠腎損傷的病理生理機(jī)制及血必凈對其保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：膿毒癥是由感染引發(fā)的全身炎癥反應(yīng)綜合癥( systemicinflammatory response syndrome，SIRS)，極易發(fā)展成為膿毒性休克和多臟器功能障礙綜合癥（multiple organ dysfunction syndrome，MODS），是臨床危重病患者的主要死亡原因之一，尤其合并急性腎衰竭(acuterenal failure，ARF)時其病死率更高。但目前臨床上尚缺乏針對細(xì)菌膿毒癥的有效防治措施，膿毒癥

2、的治療一直是困擾醫(yī)務(wù)工作者的一個難題。而血必凈注射液具有活血化淤、改善血管通透性，減輕炎癥反應(yīng)的作用。本研究擬通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation puncture，CLP)方法建立與臨床膿毒癥( sepsis)相關(guān)較強(qiáng)的大鼠CLP模型，觀察腎病理學(xué)變化、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在腎組織的表達(dá)，監(jiān)測血清腫瘤壞死因子( tumor necrosis fa

3、ctor alpha，TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)的變化，進(jìn)一步探討膿毒癥腎損傷的病理生理機(jī)制及血必凈的治療保護(hù)作用，為臨床防治膿毒癥提供新的思路。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)采用CLP法制作膿毒癥大鼠模型。選用健康成年Spragne-Dawley(SD)大鼠144只，體重200～230g，隨機(jī)分為4組：正常對照組(A組)24只、假手術(shù)組(B組)24只、膿毒癥模型組(C組)48只、血必凈治療組(D

4、組)48只。每組動物按照時間點(diǎn)術(shù)后6h、24h、48h、72h再分為4個亞組，其中A、B組各6只，C、D組各12只。各組大鼠在術(shù)前用10％水合氯醛(3ml/kg)麻醉。其中血必凈治療組術(shù)后分別于0h、12h、24h、36h、48h、60h靜脈注射血必凈注射液，每次劑量為4ml/kg；膿毒癥模型組依同法平行注射生理鹽水。CLP術(shù)畢均給予皮下注射10ml生理鹽水抗休克處理。于CLP術(shù)畢開始計時，在相應(yīng)時間點(diǎn)6h、24h、48h、72h將動物

5、麻醉后，經(jīng)腹主動脈采血，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附( enzyme-linked immunosorbent ssay，ELISA)法測定血清TNF-α及IL-6的濃度，同時分別監(jiān)測相同時間點(diǎn)的血清尿素氮( blood ureanitrogen，BUN)和肌酐(creatine，Cr)水平。取左腎，4％多聚甲醛固定，制成石蠟切片，行蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色光鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組化檢測VEGF的表達(dá)。<

6、br>　　 結(jié)果：1各組一般情況觀察：A組無死亡，飲食、大小便正常，反應(yīng)靈敏，呼吸平穩(wěn)，被毛順滑有光澤，喜扎堆取暖。B組大鼠術(shù)后30min左右完全清醒，一般情況同A組，剖腹未見惡臭、腸管水腫壞死等表現(xiàn)。C組大鼠出現(xiàn)蘇醒延遲，醒后精神萎靡，身體蜷縮基本不活動，少量進(jìn)水，對外界反應(yīng)遲鈍，呼吸頻率加快，被毛蓬松少光澤，大便稀軟，不再扎堆取暖。24h出現(xiàn)死亡大鼠。剖腹可見惡臭味血性滲液，腸管水腫粘連，盲腸壞死變黑。D組與C組相比，臨床表現(xiàn)明顯

7、減輕，死亡例數(shù)減少。
　　 2各組大鼠腎臟組織學(xué)改變：A組腎組織結(jié)構(gòu)完整，未見水腫、空泡變性、壞死等。B組與A組無明顯差異。C組與對照組相比各組織結(jié)構(gòu)清晰度下降，腎組織大量炎性細(xì)胞浸潤，腎血管廣泛微血栓形成和腎小球毛細(xì)血管淤血。腎小管上皮細(xì)胞空泡樣變，排列紊亂，小管管腔狹小，間質(zhì)充血、水腫。甚至出現(xiàn)核固縮，細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失。D組較C組病理損傷輕且減輕趨勢明顯。
　　 3生化指標(biāo)觀察：本實(shí)驗(yàn)所有生化指標(biāo)A組與B組差異均無統(tǒng)計學(xué)

8、意義(P＜0.05)。CLP術(shù)后，C組血清TNF-α水平在6h即明顯升高（42.37±2.96pg/ml），且一直維持較高水平； IL-6水平6h亦明顯升高（197.96±6.23pg/ml），24h達(dá)到高峰（520.00±29.1 Spg/ml）；BUN水平從6h開始明顯升高（14.90±0.71mmol/L），Cr較BUN升高時間較晚，24h顯著升高（106.73±7.45umol/L），與A組、B組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)

9、。D組TNF-α、IL-6、BUN、Cr水平顯著低于相同時間點(diǎn)未治療組(P＜0.05)。
　　 4腎組織VEGF表達(dá)：VEGF主要著色部位為胞漿。A組、B組不表達(dá)或少量表達(dá)，C組于6h時開始免疫組織化學(xué)評分（Immunohistochemistryscore，IHS）顯著升高（1.50±0.55），48h達(dá)到高峰（9.33±2.34）且一直表達(dá)較高水平，與A組、B組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，D組24h亦出現(xiàn)表達(dá)（2.

10、33±0.52），與C組比較明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，48h、72h差異亦有意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：1通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)制做膿毒癥腎損傷動物模型是可靠的方法，值得在有關(guān)膿毒癥的實(shí)驗(yàn)研究中推廣。
　　 2膿毒癥大鼠體內(nèi)TNF-αIL-6及VEGF均顯著升高，說明它們可能參與了膿毒癥腎損傷的發(fā)病過程，具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。
　　 3應(yīng)用血必凈治療后各組指標(biāo)明顯改善，為血必凈應(yīng)用于膿毒癥