2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  急性腎損傷在膿毒癥時(shí)的發(fā)病率和病死率高,是威脅危重病人生命安全的重要因素。膿毒癥時(shí)過度釋放的炎癥介質(zhì)可激活中性粒細(xì)胞產(chǎn)生超氧陰離子、活性氧等導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷。腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是膿毒癥急性腎損傷的重要發(fā)病機(jī)制,保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能的完整性顯得尤為重要。肝素酶可特異性裂解細(xì)胞膜的多糖包被,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷,新近發(fā)現(xiàn)肝素酶除能發(fā)揮酶的功能外還具備促炎作用,本論文在細(xì)胞水平上探討肝素酶與膿毒癥導(dǎo)致內(nèi)皮損傷的相關(guān)性及可能機(jī)制,

2、期待能開拓出治療膿毒癥腎損傷的新途徑。
  方法:
  原代培養(yǎng)大鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)后,用免疫熒光法鑒定。將長勢良好的第3-5代細(xì)胞按照處理因素不同分組,具體為空白對照組、脂多糖(LPS)組和肝素組。采用透射電鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)。免疫熒光法觀察內(nèi)皮細(xì)胞活性氧(ROS)的表達(dá),硝酸還原酶法檢測一氧化氮(NO)濃度,蛋白免疫印跡(WesternBlot)法檢測肝素酶(Hpa)、粘附分子(ICAM-1,VCAM-1)、磷

3、酸化核抑制蛋白(IκB)及磷酸肌醇-3激酶(PI3K)和磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶(Akt)的表達(dá)。
  結(jié)果:
  1.原代培養(yǎng)腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞,48小時(shí)可鋪滿瓶底,經(jīng)傳代后成為穩(wěn)定細(xì)胞系,光鏡及透射電鏡觀察符合內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài),Ⅷ因子抗原于胞漿內(nèi)陽性表達(dá),成功建立體外RMVEC模型。2.與空白對照組相比,10mg/L LPS組細(xì)胞在透射電鏡下課觀察到粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體空泡變性明顯,LPS(10 mg/L)組ROS顯著增加(p

4、<0.05),10mg/L LPS刺激5分鐘時(shí)可檢測到ROS表達(dá),刺激30分鐘ROS表達(dá)至峰值水平,NO表達(dá)趨勢與ROS相同;Hpa在3、6、12、24小時(shí)組表達(dá)呈時(shí)間依賴性增加(p<0.05);細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)和內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)表達(dá)增加。3.與對照組相比,1U/mlHpa刺激細(xì)胞后膜變形明顯,小突起增加;ICAM-1和VCAM-1表達(dá)增加(p<0.05);PI3K表達(dá)和IκB、Akt磷酸化水平增加

5、(p<0.05)。與LPS組和Hpa組相比較,肝素(2.5U/ml、5U/ml、10U/ml)組在透射電鏡下細(xì)胞膜完整,ROS、NO表達(dá)量降低; Hpa和ICAM-1、VCAM-1表達(dá)下降(p<0.05),磷酸化IκB、Akt表達(dá)下降(p<0.05)。
  結(jié)論:
  1.脂多糖可損傷內(nèi)皮細(xì)胞,主要表現(xiàn)在①細(xì)胞膜形態(tài)改變②粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體等細(xì)胞器發(fā)生空泡變性③增加氧化應(yīng)激產(chǎn)物ROS、NO,增加Hpa和ICAM-1和VCAM

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