旋覆花內(nèi)酯調(diào)制血管細(xì)胞炎性應(yīng)答的作用機(jī)制及藥理學(xué)意義.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后再狹窄和高血壓等心血管疾病是由多種因素對(duì)血管內(nèi)皮刺激所觸發(fā)的慢性炎癥反應(yīng)，伴隨發(fā)生的血小板活化和聚集、單核細(xì)胞黏附及炎性介質(zhì)的釋放和由此導(dǎo)致的血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth musele cells，VSMCs)由中膜向內(nèi)膜下遷移和增殖均屬于炎癥相關(guān)事件。VSMCs作為主要的細(xì)胞成分，在血管炎性病變發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，約有上百種基因表達(dá)出現(xiàn)異常，進(jìn)而引起細(xì)胞表型與功能的改變。 在炎癥反應(yīng)過(guò)程

2、中，核因子кB(NF-кB)作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，參與介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞增殖與凋亡等病理生理過(guò)程。序列比對(duì)分析表明，在炎性因子誘導(dǎo)下，VSMCs表達(dá)異常的基因大多受NF-кB的反式激活。因此，調(diào)制血管細(xì)胞的NF-кB活性，阻斷炎性應(yīng)答信號(hào)通路，減少血管損傷部位炎性介質(zhì)的釋放，已成為目前研制新型抗心血管疾病藥物的重要策略。 歐亞旋覆花是一種用于治療偏頭痛的傳統(tǒng)中藥，具有消炎、鎮(zhèn)痛、活血化瘀的功效，用有機(jī)溶劑萃取法從歐亞

3、旋覆花中分離得到三種具有抗炎鎮(zhèn)痛作用的單體.旋覆花內(nèi)酯同系物(BL，1-O-ABL，1,6-O<,2>-ABL)，為了證實(shí)ABL對(duì)細(xì)菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的單核/巨噬細(xì)胞活化和炎性基因表達(dá)的影響，探討ABL對(duì)炎性因子誘導(dǎo)的VSMCs NF-кB活化及其由此引發(fā)的炎性介質(zhì)釋放和增殖應(yīng)答的抑制效應(yīng)和信號(hào)通路，本課題從以下幾方面進(jìn)行了研究。 1 旋覆花內(nèi)酯抑制VSMCs炎性反應(yīng)與阻斷NF-кB活化

4、有關(guān)NF-кB作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子對(duì)于炎癥基因的誘導(dǎo)性表達(dá)起著關(guān)鍵調(diào)控作用。為確定1-O-ABL對(duì)VSMCs炎癥應(yīng)答的影響，本研究觀察ABL對(duì)LPS誘導(dǎo)的VSMCs NF-кB活化及其下游基因表達(dá)的抑制效應(yīng)，并初步探討其機(jī)制。 2 乙酰化側(cè)基增強(qiáng)旋覆花內(nèi)酯的抗炎活性組分分析表明，旋覆花的氯仿提取物中還含有1-O-ABL的兩種同系物，BL和1，6-O<,2>-ABL，三種同系物在結(jié)構(gòu)上的差異在于其側(cè)基乙?；鶖?shù)目的不同。關(guān)于ABL

5、的抗炎活性是受其母核結(jié)構(gòu)所決定的和/或是與乙?；瘋?cè)基有關(guān)尚不清楚。本部分研究通過(guò)比較三種同系物對(duì)炎性因子誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞活化的抑制作用，以確定其抗炎活性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。 3 旋覆花內(nèi)酯通過(guò)經(jīng)典途徑抑制IкBα磷酸化降解本部分用抗炎效應(yīng)最強(qiáng)的1，6-O<,2>-ABL探討了其對(duì)LPS/IFN-γ誘導(dǎo)的RAW264.7單核/巨噬細(xì)胞IкBα激酶(IкB kinase，IKK)活化以及NF-кB經(jīng)典與非經(jīng)典兩條信號(hào)途徑的影響，以

6、期闡明ABL抑制細(xì)胞炎性應(yīng)答的信號(hào)途徑。 4 ABL抑制PDGF刺激的VSMCs增殖及損傷誘導(dǎo)的新生內(nèi)膜形成動(dòng)脈粥樣硬化、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)血管成形術(shù)后再狹窄等慢性血管炎性病變主要涉及內(nèi)膜的損傷并由此導(dǎo)致的VSMCs從動(dòng)脈中膜向內(nèi)膜下遷移和細(xì)胞增殖是血管炎癥反應(yīng)的后期事件。VSMCs是血管損傷后的主要細(xì)胞成份，ABL對(duì)已經(jīng)發(fā)生表型轉(zhuǎn)化的細(xì)胞是否能夠阻斷其增殖信號(hào)途徑的活化，是該藥物研發(fā)應(yīng)用需要解決的問(wèn)題。 結(jié)果表明，ABL

7、通過(guò)抑制損傷誘導(dǎo)的增殖信號(hào)途徑的活化，從而抑制血管內(nèi)膜的增生。 1 ABL通過(guò)選擇性抑制NF-кB經(jīng)典激活途徑中IKKβ磷酸化而抑制炎癥因子誘導(dǎo)的IβBα磷酸化、降解，繼而阻斷NF-кB的活化及核轉(zhuǎn)位。 2 BL、1-O-ABL及1，6-O<,2>-ABL抗炎活性依次增強(qiáng)，乙?；揎椏稍鰪?qiáng)旋覆花內(nèi)酯的抗炎活性。 3 ABL是一種調(diào)制VSMCs及RAW264.7細(xì)胞炎性應(yīng)答的有效單體。 4 ABL通過(guò)阻斷P