GPR4配體溶血卵磷脂及鞘氨醇磷脂酰膽堿介導(dǎo)HUVEC細(xì)胞生長(zhǎng)及其相關(guān)信號(hào)通路.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩50頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:研究GPR4(G protein-coupled receptor 4,GPR4)配體溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine,LPC)及鞘氨醇磷脂酰膽堿(sphingosylphosphorylcholine,SPC)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的生長(zhǎng)效應(yīng)及有關(guān)信號(hào)通路。 方法:采用脂質(zhì)體2000將裝有GPR4受體基因的p

2、EFneo真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HUVEC,并通過(guò)G418(800μg/ml)篩選獲得GPR4基因穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株;RT-PCR法鑒定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后GPR4受體mRNA的表達(dá)情況;MTT法檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)活力;AO染色法觀察LPC及SPC對(duì)HUVEC細(xì)胞造成的形態(tài)改變; Western blot法檢測(cè)LPC及SPC與其受體相互作用后對(duì)caspase-3前體、p-JNK、p-Akt及MMP-2蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果:成功獲得了GPR

3、4基因穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株;隨著LPC(0.5,1,2,4,8μmol/l)及SPC(0.25,0.5,1.0μmol/l)濃度的增加, LPC使HUVEC細(xì)胞活力下降, 570nm OD值依次為:1.50±0.136;1.45±0.050;1.42±0.208;1.36±0.191;1.32±0.122;1.08±0.189。SPC使細(xì)胞活力依次增強(qiáng),570nm OD值依次為:1.08±0.089;1.15±0.097;1.21±0.096

4、;1.30±0.11。LPC對(duì)細(xì)胞造成一定的損傷,隨著濃度的增加,有些細(xì)胞可見(jiàn)致密濃染的黃綠色,而SPC卻對(duì)細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有造成明顯的改變。LPC使caspase-3前體蛋白的表達(dá)先增加后減少,MMP-2蛋白的表達(dá)下調(diào),活化JNK激酶,使p-JNK蛋白的表達(dá)先增加后減少。SPC使p-Akt及MMP-2的表達(dá)先增加后減少,抑制caspase-3前體蛋白的表達(dá)。 結(jié)論: 1. LPC與受體GPR4作用后使HUVEC細(xì)胞活性下降,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論