納米化殺手肽的制備表征和抗新生隱球菌感染的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[研究背景]新生隱球菌所致的感染好發(fā)于細(xì)胞免疫功能低下患者,隨著器官移植、骨髓移植等新技術(shù)的發(fā)展以及AIDS患者的增多,隱球菌感染的發(fā)生率也呈逐年明顯上升的趨勢(shì)。研究發(fā)現(xiàn)隱球菌是一種胞內(nèi)兼性寄生菌,不僅可逃避巨噬細(xì)胞吞噬且即使被吞噬后也可存活于巨噬細(xì)胞內(nèi),可能是導(dǎo)致隱球菌病臨床復(fù)發(fā)的重要原因。因此選用合適載體將更多藥物輸送至感染細(xì)胞內(nèi)部是治愈該病的關(guān)鍵。殺手肽(killer peptide),是近期研發(fā)的一種人工合成十肽,其序列為AKV

2、TMTCSAS,它是一種水溶性多肽,對(duì)耐氟康唑白念珠菌、利什曼原蟲(chóng)、巴西芽生菌和新生隱球菌均具有較強(qiáng)殺滅作用,初步研究表明其作用靶點(diǎn)主要為真菌細(xì)胞壁β1,3-葡聚糖。多肽類抗生素由于其結(jié)構(gòu)完全不同于傳統(tǒng)抗真菌藥物,目前耐藥發(fā)生率較低,且同傳統(tǒng)治療深部真菌感染的藥物相比,靶點(diǎn)位于細(xì)胞壁因此對(duì)哺乳動(dòng)物副作用小,因此殺手肽具有安全無(wú)毒和不易耐藥等優(yōu)點(diǎn)。 [研究目的]本研究旨在選擇合適納米材料作為殺手肽KP的有效載體,探索并優(yōu)化制備工藝

3、,制備出具有細(xì)胞內(nèi)靶向性且安全的載藥納米粒。 [研究方法]基于以上目的,經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn),我們選擇目前研究較多的載體材料聚乳酸-羥基乙酸(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA),采用雙乳法制備殺手肽-聚乳酸羥基乙酸納米復(fù)合體(KP-PLGA-NP),并采用透射電鏡、掃描電鏡、動(dòng)態(tài)光散射、測(cè)定包封率載藥量、考察體外釋放等手段進(jìn)行相應(yīng)的表征測(cè)定；采用平板計(jì)數(shù)法驗(yàn)證人工合成殺手肽對(duì)新生隱球菌ATCC32609的

4、體外殺滅作用；構(gòu)建小鼠隱球菌系統(tǒng)感染模型,通過(guò)生存期和重要臟器染菌量的變化比較納米制劑同未包裹KP的療效變化,并通過(guò)生化指標(biāo)考察納米制劑毒副作用情況。 [研究結(jié)果]成功制備出并表征KP-PLGA-NP;驗(yàn)證不同參數(shù)下其粒徑、包封率、分散度的變化趨勢(shì),證明PVA濃度是影響表征的主要參數(shù)；證實(shí)人工合成KP具有較強(qiáng)抗新生隱球菌ATCC32609作用,其作用強(qiáng)度同濃度正相關(guān),但療效不及CBS6995菌株,可能與ATCC32609菌株毒力

5、較強(qiáng)有關(guān)；同未被包裹的KP相比較,納米制劑使隱球菌系統(tǒng)感染小鼠生存期明顯延長(zhǎng),重要臟器染菌量顯著下降；納米物物對(duì)肝、腎及血液系統(tǒng)均未產(chǎn)生明顯損害。 [結(jié)論]納米材料包裹KP可顯著增強(qiáng)抗系統(tǒng)性隱球菌感染療效,其作用機(jī)制可能與納米材料的MPS細(xì)胞內(nèi)被動(dòng)靶向性、對(duì)MPS系統(tǒng)的激活作用及減少肽類藥物同體內(nèi)各種酶的接觸有關(guān),因此納米材料作為一種新型藥物傳遞與控釋的載體,具有靶向性、緩釋性、定時(shí)性和穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)。生物醫(yī)學(xué)和納米技術(shù)的結(jié)合將給