丙戊酸鈉、苯妥英鈉、拉莫三嗪對戊四氮點燃大鼠肝腎細胞影響的研究.pdf

1、目的：癲癇(epilepsy,EP)是一組由大腦神經(jīng)元異常放電引起的以短暫性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征的慢性腦部疾病。癲癇對人類的健康和經(jīng)濟發(fā)展構(gòu)成很大的威脅。目前對癲癇的治療仍以各種抗癲癇藥物(anti-epileptic drugs,AEDs)為主，而且大部分患者需要長期服藥治療，這些藥物在體內(nèi)經(jīng)過肝腎代謝，所以長期服藥就會加重肝腎的負擔，給患者帶來福音的同時，不可避免的出現(xiàn)了藥物的二重損害，產(chǎn)生相關的副作用。因此，近年來抗癲癇藥物

2、引起的肝腎功能損害越來越受到臨床醫(yī)生的關注。本實驗用戊四氮(Pentetrazole，PTZ)點燃Sprague Dawley(SD)大鼠，應用抗癲癇藥物丙戊酸鈉(valproate sodium，VPA)、苯妥英鈉(phenytoin，PHT)和拉莫三嗪(lamotrigine，LTG)干預癲癇大鼠，觀察各種藥物對癇性發(fā)作的控制情況，并采用免疫組織化學方法檢測丙戊酸鈉、苯妥英鈉、拉莫三嗪治療后的癲癇大鼠和對照組大鼠的肝腎細胞凋亡的差異

3、，探討丙戊酸鈉、苯妥英鈉、拉莫三嗪對大鼠肝腎細胞凋亡的影響及可能的機制，為避免藥物造成肝腎損害及指導臨床醫(yī)生選擇抗癲癇藥物提供理論依據(jù)。 方法：35只SD大鼠隨機分為5組，每組7只。隨機選取1組作為正常對照組(NS組)；另4組為實驗組，隨機分為癲癇對照組(PTZ組)、丙戊酸鈉組(VPA組)、苯妥英鈉組(PHT組)、拉莫三嗪組(LTG組)。采用戊四氮致癇的大鼠癲癇模型，NS組腹腔注射生理鹽水，其余4組腹腔注射戊四氮，持續(xù)2周。然后

4、NS組和PTZ組給予生理鹽水灌胃，VPA組、PHT組和LTG組給予藥物灌胃，持續(xù)3周，完成干預。觀察戊四氮點燃大鼠的發(fā)作情況并對其進行Racine分級評分，評價藥物對癲癇發(fā)作的控制程度，采用HE染色方法觀察肝腎組織大體結(jié)構(gòu)的改變，采用免疫組織化學方法檢測藥物干預后的癲癇大鼠的肝腎中Bax和Bcl-2的表達情況，并計算凋亡率。結(jié)果： 1.PTZ點燃大鼠的行為特征：實驗組大鼠平均在7～9次注射PTZ后出現(xiàn)1～2級驚厥發(fā)作；注射PTZ

5、12～15次后，驚厥發(fā)作強度增強、頻率逐漸增加，繼而進入大發(fā)作期，發(fā)作持續(xù)數(shù)分鐘后可短時緩解，隨后又反復發(fā)作；整個發(fā)作持續(xù)約30～50 min后逐漸緩解，發(fā)作停止后，動物可自行活動。NS組大鼠注射生理鹽水后無任何發(fā)作跡象和抽搐表現(xiàn)，行為正常。 2.藥物干預后對癲癇的控制：NS組無抽搐發(fā)作；PTZ組抽搐持續(xù)發(fā)作；PHT組有2只(1/3)持續(xù)發(fā)作，死亡1只；其他2組的抗癲癇藥物對癲癇發(fā)作控制良好，經(jīng)灌胃治療后抽搐發(fā)作次數(shù)減少或無抽搐

6、發(fā)作。 3.大體結(jié)構(gòu)：肝臟由四葉組成，灌注前呈紫紅色，灌注后呈淡黃色，表面光滑，未見腫脹、結(jié)節(jié)及腫物生長，各組動物肝臟所占體重比例比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。腎臟呈蠶豆狀，表面光滑，無結(jié)節(jié)，各組動物腎臟所占體重比例比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 4 HE染色結(jié)果：VPA組動物肝臟組織切片在低倍鏡下觀察，見肝臟及肝細胞基本結(jié)構(gòu)正常，胞漿內(nèi)近圓形的空泡變性，細胞核被壓向一側(cè)，空泡變性細胞陽性率與其他四組比較明顯升高

7、，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。腎臟組織切片在低倍鏡下觀察，其基本結(jié)構(gòu)正常，與其它組相比未見明顯異常，余4組動物的肝。腎組織切片觀察均正常。 5 免疫組織化學染色結(jié)果：陽性凋亡細胞胞膜完整，胞漿呈棕色或棕黃色著染，為細小顆粒狀或彌漫均勻染色，細胞核染色質(zhì)致密，形狀不一，大小不等，形成團塊狀邊集于核膜處，各陽性凋亡細胞形態(tài)尚規(guī)則，于凋亡細胞周圍可見呈圓形或卵圓形、胞漿濃縮、可有或無核碎片的凋亡小體。 6 肝細胞Bax與Bc

8、l-2的表達LTG組、PHT組、VPA組、PTZ組、NS組動物的Bax染色陽性率分別為0.283±0.021，0.090±0.036，0.300±0.101，0.103±0.042，0.097±0.031，其中LTG組和VPA組陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，PHT組、PTZ組和NS組三組陽性率比較差異也無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，L,TG組、VPA組兩組陽性率較PHT組、PTZ組、NS組三組陽性率明顯升高，差異有顯著統(tǒng)計

9、學意義(P＜0.05)。 LTG組、PHT組、VPA組、PTZ組、NS組動物的Bcl-2染色陽性率分別為0.080±0.026，0.373±0.096，0.090±0.036，0.377±0.012，0.327±0.060，其中LTG組和VPA組陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，PHT組、PTZ組和NS組三組陽性率比較差異也無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，IXG組、VPA組兩組陽性率較PHT’組、PTZ組、NS組三組陽性

10、率明顯降低，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 7 腎臟細胞Bax與Bcl-2表達陽性結(jié)果LTG組、PHT組、VPA組、PTZ組、NS組動物的Bax染色陽性率分別為0.100±0.026，0.047±0.038，0.430±0.036，0.060±0.010，0.054±0.054，其中LTGr組、PHT組、PTZ組、NS組四組陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而VPA組與上述四組比較陽性率明顯升高，差異有顯著統(tǒng)計

11、學意義(P＜0.05)。 LXG組、PHT組、VPA組、PTZ組、NS組動物的Bcl-2染色陽性率分別為0.360±0.030，0.357±0.074，0.133±0.047，0.327±0.032，0.370±0.010，其中LTG組、PHT組、PTZ組、NS組四組陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而VPA組與上述四組比較陽性率明顯降低，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.本實驗用戊四

12、氮制作癲癇大鼠模型，在腹腔注射約1周時出現(xiàn)1～2級驚厥發(fā)作，2周時出現(xiàn)5級驚厥發(fā)作，說明成功點燃此模型大約需要2周時間。 2.采用藥物干預癲癇大鼠發(fā)現(xiàn)VPA、LTG對癲癇控制情況良好，PHT?？刂魄闆r不良。 3.采用HE染色方法觀察肝腎大體結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)VPA組動物肝臟細胞出現(xiàn)明顯的空泡變性，說明VPA影響脂類在肝臟中的代謝，提示VPA導致的肝損傷可能與肝臟長期脂肪變性有關。 4 采用免疫組織化學方法染色Bax和Bc