丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊對(duì)癲癇大鼠作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　建立戊四唑癲癇模型，采用丙戊酸鈉、烏靈膠囊單用或者聯(lián)合使用，觀察戊四唑致癇大鼠癲癇發(fā)作情況；通過HE染色法考察對(duì)癲癇大鼠海馬神經(jīng)元保護(hù)作用的影響；通過免疫組織化學(xué)法、實(shí)時(shí)定量PCR法和Western Blot檢測丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊對(duì)癲癇大鼠海馬中NMDAR1、GABRA2、GRM5、IL-1β、NF-κB/p65和TLR4表達(dá)的影響。
　　方法：
　　將SD大鼠雌雄分別隨機(jī)分為5組，每組10只，A組為空白

2、對(duì)照組，B組為模型組，C組為丙戊酸鈉（VPA）組，D組為烏靈膠囊組，E組為丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組。各組均選用灌胃法給予處理藥物，A組與B組給予等體積生理鹽水；C組給予VPA；D組給予烏靈膠囊；E組給予VPA和烏靈膠囊。每日上午9時(shí)左右給藥，給藥lh后，A組腹腔注射生理鹽水，其他各組腹腔注射戊四唑（PTZ）溶液，每日1次，連續(xù)4周。腹腔注射PTZ溶液后，觀察記錄半小時(shí)內(nèi)大鼠癇性發(fā)作級(jí)別。4周造模成功后，于第29天在各組隨機(jī)選出5只大鼠，用

3、10％水合氯醛腹腔麻醉后，采用生理鹽水和4%甲醛灌注后斷頭取腦，制備石蠟切片，進(jìn)行普通病理學(xué)檢查以及用于免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠海馬中NMDAR1、GABRA2、GRM5、IL-1β、NF-κB/p65和TLR4表達(dá)的情況。各組剩余大鼠，用10%水合氯醛腹腔麻醉后，斷頭取出完整海馬組織，通過實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot檢測各組大鼠海馬中NMDAR1、GABRA2、GRM5、IL-1β、NF-κB/p65和TLR4表達(dá)的情況

4、。
　　結(jié)果：
　　1.在戊四唑誘導(dǎo)的癲癇模型中，丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組可有效抑制癲癇發(fā)作，顯著降低癲癇發(fā)作的級(jí)別和總次數(shù)，效果優(yōu)于丙戊酸鈉組和烏靈膠囊組。
　　2.丙戊酸鈉組、烏靈膠囊組和丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組均能改善海馬CA3區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞的損傷，但丙戊酸鈉組和丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組效果優(yōu)于烏靈膠囊組。
　　3.免疫組織化學(xué)法檢測NMDAR1、GRM5、NF-?B/p65、TLR4和IL-1β在空白對(duì)照組大鼠海

5、馬中表達(dá)較少；在模型組大鼠海馬中有大量表達(dá)；在丙戊酸鈉組、烏靈膠囊組、丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組大鼠海馬中表達(dá)量明顯降低，各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中IL-1β在空白對(duì)照組和丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組大鼠海馬表達(dá)中無明顯差異（P>0.05）。GABRA2在空白對(duì)照組大鼠海馬大量表達(dá)，在模型組大鼠海馬中表達(dá)較少；在丙戊酸鈉組、烏靈膠囊組、丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組大鼠海馬中表達(dá)量明顯增多，各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

6、>　　4.實(shí)時(shí)定量PCR檢測NMDAR1、GRM5、NF-κB/p65、TLR4和IL-1β在空白對(duì)照組大鼠海馬中表達(dá)較少，在模型組大鼠海馬中有大量表達(dá)，在丙戊酸鈉組、烏靈膠囊組、丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組大鼠海馬中表達(dá)趨勢(shì)明顯降低。GABRA2在空白對(duì)照組大鼠海馬中大量表達(dá)，在模型組大鼠海馬中表達(dá)較少；在丙戊酸鈉組、烏靈膠囊組、丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組大鼠海馬中表達(dá)量有上升趨勢(shì)。
　　5.Western Blot檢測NMDAR1、GR

7、M5、NF-κB/p65、TLR4和IL-1β在空白對(duì)照組大鼠海馬中表達(dá)較少，在模型組大鼠海馬中有大量表達(dá)，在丙戊酸鈉組、烏靈膠囊組、丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組大鼠海馬中表達(dá)量明顯降低（P<0.05）。GABRA2在空白對(duì)照組大鼠海馬大量表達(dá)，在模型組大鼠海馬中表達(dá)較少；在丙戊酸鈉組、烏靈膠囊組、丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊組大鼠海馬中表達(dá)量顯著上升（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　丙戊酸鈉聯(lián)合烏靈膠囊能更好地控制癲癇大鼠癇性發(fā)作，減