金頂側(cè)耳質(zhì)量評價方法及對環(huán)磷酰胺致小鼠肝毒性影響的研究.pdf

1、目的：①建立長白山金頂側(cè)耳中延胡索酸、煙酸和多糖的含量測定方法，為科學(xué)評價及有效控制長白山金頂側(cè)耳質(zhì)量提供實踐方法和參考數(shù)據(jù)；②提取精制金頂側(cè)耳多糖，并探討其對環(huán)磷酰胺所致小鼠肝毒性影響的保護(hù)作用，為金頂側(cè)耳多糖的臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：①采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法，色譜柱為C18柱（5μm，250 mm×4.6 mm），流動相為甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液（5:95），檢測波長216 nm，流速

2、為1.0 mL/min，柱溫為25℃，測定長白山金頂側(cè)耳中延胡索酸的含量；采用反相離子對高效液相色譜（IP-RP-HPLC）法，色譜柱為C18柱（5μm，250 mm×4.6 mm），流動相為甲醇-0.004mol/L庚烷磺酸鈉-乙酸（5:95:0.2），檢測波長263 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為25℃，測定長白山金頂側(cè)耳中煙酸的含量；分別采用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法測定長白山金頂側(cè)耳中多糖的含量，并進(jìn)行比較。②采用水提

3、醇沉法提取金頂側(cè)耳多糖，并用三氯乙酸法除蛋白得到多糖粗品，用苯酚硫酸法測其多糖含量，考馬斯亮藍(lán)法測其蛋白質(zhì)含量。將實驗小鼠分為空白對照組、模型組和金頂側(cè)耳多糖大（0.8 g·kg-1·d-1）、中（0.4 g·kg-1·d-1）、小（0.2 g·kg-1·d-1）劑量組，灌胃給藥同時腹腔注射環(huán)磷酰胺（Cyclophosphamide，CP）制作小鼠化療損傷模型，給藥10天后，分別測定小鼠肝組織中丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）含量；

4、肝微粒體氨基比啉-N-脫甲基酶（CYP2E1）和紅霉素-N-脫甲基酶（CYP3A）活性；并用透射電鏡觀察小鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：①在0.16～1.6μg范圍內(nèi)，延胡索酸對照品進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999，n=5），樣品的平均回收率為101.59％，RSD=1.28%（n=6）；在0.08～0.4μg范圍內(nèi)，煙酸對照品進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999，n=5），樣品的平均回收率

5、為103.84%，RSD=2.80%（n=9）；苯酚-硫酸法測定金頂側(cè)耳多糖的平均回收率為99.85%，RSD=1.35%（n=9）；蒽酮-硫酸法測定多糖的平均回收率為100.07%，RSD=1.06%（n=9）；蒽酮-硫酸法測得的多糖含量較高。②與模型組比較，金頂側(cè)耳多糖大劑量組明顯能降低小鼠肝組織中MDA（P<0.05）含量和提高GSH（P<0.01）含量；金頂側(cè)耳多糖中劑量組對環(huán)磷酰胺造模小鼠的肝微粒體氨基比啉-N-脫甲基酶活性有