五子衍宗方對環(huán)磷酰胺致小鼠睪丸損傷的保護作用.pdf

1、目的：通過給小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺（CTX）建立睪丸損傷模型，探討五子衍宗方對環(huán)磷酰胺造成的睪丸損傷的保護作用，并研究其作用機制。
　　方法：將雄性 Babl/C小鼠隨機分為正常對照組、模型組、五子衍宗方低、中、高劑量組。五子衍宗方低劑量（100 mg/kg），五子衍宗方中劑量組（200 mg/kg），五子衍宗方高劑量組（400 mg/kg）預(yù)給藥三天之后，除正常對照組之外，其余各組腹腔注射CTX200 mg/kg，每周一次，連續(xù)四

2、次，同時五子衍宗方低、中、高劑量組繼續(xù)給藥，末次給予CTX后禁食12 h處死小鼠。檢測小鼠的體重，睪丸重量，睪丸指數(shù)，精子計數(shù)，精子活力，HE染色檢測睪丸的組織病理學(xué)變化，ElISA檢測血清中8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）的含量，單細胞凝膠電泳技術(shù)檢測睪丸生精細胞的DNA損傷，流式細胞術(shù)檢測精原干細胞數(shù)量，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口標記技術(shù)（TUNEL)的染色方法檢測生精細胞凋亡，Western blot檢測睪丸組織中P5

3、3、p-P53、Bcl-2、Bax、Casepase-3蛋白表達。
　　結(jié)果：五子衍宗方能夠升高CTX所致小鼠的體重、睪丸重量、睪丸指數(shù)下降；改善精子數(shù)目和精子活力；HE染色發(fā)現(xiàn)五子衍宗方組改善睪丸內(nèi)曲細精管生精功能，提高各級生精細胞數(shù)量；五子衍宗方可以提高機體的抗DNA損傷能力，體現(xiàn)在降低血清中8-OHdG的含量，降低小鼠睪丸中的Olive尾矩、尾距、尾長和尾部DNA含量（P<0.05或P<0.01），降低P53和p-P53的蛋

4、白表達；流式細胞術(shù)顯示五子衍宗方可升高精原干細胞數(shù)量；TUNEL方法顯示五子衍宗方可減少睪丸內(nèi)生精細胞凋亡；同時五子衍宗方可升高Bcl-2蛋白水平，而降低Bax蛋白水平，使Bcl-2與Bax的比值升高，并且降低Casepase-3蛋白的表達，表明其可能通過調(diào)控Bcl-2蛋白家族進而影響Casepase-3的表達而較少環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的生精細胞凋亡。
　　結(jié)論：五子衍宗方能夠減輕由 CTX引起的的 DNA損傷導(dǎo)致的小鼠生精細胞凋亡，其機