骨髓基質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合rhBMP-2-rhVEGF治療兔早期激素性股骨頭缺血性壞死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：?jiǎn)渭傿MSCs治療激素性股骨頭缺血性壞死的效果尚不理想,探討B(tài)MSCs聯(lián)合rhBMP-2/rhVEGF在治療兔早期激素性股骨頭缺血性壞死的治療作用,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù),探索一種治療股骨頭早期缺血性壞死的新方法。
　　方法：1.骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的獲取和培養(yǎng):成年新西蘭白兔髂后上嵴處抽取骨髓2ml,所獲骨髓種植于細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)。培養(yǎng)液為含20％胎牛血清DMEM液,培養(yǎng)箱溫度37oC,含5%CO2,100%飽和濕度。細(xì)胞傳代密度為

2、1×106/cm2,待第三代細(xì)胞長滿后,消化細(xì)胞并將細(xì)胞配成2×106/ml細(xì)胞懸液,復(fù)合于3×4cm2的明膠海綿上。每塊明膠海綿含細(xì)胞懸液50μl,共10萬個(gè)細(xì)胞,在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育4小時(shí)備用。2.采用Qin等實(shí)驗(yàn)方法造模后,取36只新西蘭大白兔動(dòng)物模型,隨機(jī)分為6組,每組6只。A組:模型對(duì)照組;B組:單純減壓組;C組:減壓后植入BMSCs;D組:減壓后植入BMSCs及rhBMP-2;E組:減壓后植入BMSCs及rhVEGF;F組:減

3、壓后植入BMSCs及rhBMP-2/rhVEGF。所有動(dòng)物雙側(cè)股骨頭均參加實(shí)驗(yàn),觀察動(dòng)物一般情況,并于術(shù)后4、8周各組處死3只動(dòng)物,所獲股骨頭標(biāo)本分別做X線檢查、組織切片HE染色后行光鏡觀察。測(cè)算術(shù)后4、8周修復(fù)區(qū)血管數(shù)目數(shù)及空骨陷窩數(shù),行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：1.骨髓基質(zhì)干細(xì)胞生長情況:骨髓培養(yǎng)到第5天,可見成纖維樣細(xì)胞克隆集落貼壁生長。消化傳代后2-4小時(shí)細(xì)胞貼壁生長,2-3天后細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶底。細(xì)胞傳代后2-7天呈指數(shù)生長

4、,倍增時(shí)間為48小時(shí)。2.股骨頭X線檢查:A組標(biāo)本:4周時(shí)股骨頭密度明顯增加,骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂;8周時(shí)股骨密度增高,骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂,軟骨下囊性變。其余各組鉆孔區(qū)外X線表現(xiàn)與A組隨時(shí)間變化大體一致。B組缺損區(qū)術(shù)后4周、8周只在鉆孔區(qū)邊緣密度增高,鉆孔區(qū)內(nèi)密度無明顯變化,余下各組缺損區(qū)術(shù)后4周時(shí)密度低,邊緣密度有所增高,隨著時(shí)間增加各組鉆孔區(qū)密度逐漸增加,8周時(shí)C組出現(xiàn)較稀疏骨小梁結(jié)構(gòu),D、E、F組出現(xiàn)較密的骨小梁, F組密度最高。3.股骨頭

5、組織切片觀察:A組標(biāo)本:4周時(shí)可見軟骨細(xì)胞、骨細(xì)胞及骨髓壞死,空骨陷窩增加,部分壞死骨小梁開始吸收,出現(xiàn)較多破骨細(xì)胞,骨小梁不規(guī)則,關(guān)節(jié)軟骨面磨損加重,少數(shù)標(biāo)本關(guān)節(jié)軟骨面塌陷。8周時(shí)關(guān)節(jié)軟骨面磨損與修復(fù)并存,骨髓纖維化和增生互見,骨吸收和軟骨面塌陷。B組4周標(biāo)本缺損處成骨細(xì)胞稀少,隨著時(shí)間的延長,只在鉆孔區(qū)逐漸形成骨髓組織,鉆孔邊緣形成少量的類骨質(zhì)及新生骨小梁。其軟骨面的磨損、骨小梁的紊亂以及股骨頭的塌陷都與單純?cè)炷＝M相似。其余各組4周

6、時(shí)缺損處仍可見膠原蛋白海綿,內(nèi)有多量的成骨細(xì)胞,出現(xiàn)新生血管,鉆孔邊緣形成較多的類骨質(zhì)及骨小梁。8周標(biāo)本缺損區(qū)內(nèi)骨小梁仍在修復(fù),骨髓組織成熟,髓腔內(nèi)可見增生血管,其中 D組中部分標(biāo)本可見成熟骨小梁,而E組缺損區(qū)較多新生血管;F組4周標(biāo)本缺損處有大量的成骨細(xì)胞及新生血管,8周標(biāo)本鉆孔區(qū)已經(jīng)被新生骨小梁填滿,形成正常骨小梁和骨髓組織。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,F組骨陷窩陽性數(shù)與各組比較p＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;血管數(shù)目數(shù)除與E組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外