Calpain1、calpain2和calpastatin在擬老化大鼠聽皮層及蝸核中表達(dá)的研究.pdf

1、目的：觀察Calpain1、calpain2和calpastatin在D-半乳糖所誘導(dǎo)的擬老化大鼠及自然老化大鼠聽皮層和蝸核中的表達(dá)情況。
　　方法：選取健康、耳廓反應(yīng)靈敏的7周齡SD大鼠168只，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)選取24只作為陰性對照，余下144只隨機(jī)分為2組：生理鹽水組(NS組)72只，采用每日頸背部皮下注射生理鹽水（10ml/kg/d），共8周。擬老化組(D-半乳糖組)72只，采用每日頸背部皮下注射D-半乳糖（

2、500mg/kg/d），共8周。2月齡（造模前）、4月齡（造模后0個月）、10月齡（造模后6個月）、16月齡（造模后12個月）時分別行ABR（4kHz、8kHz、16kHz、24kHz、32kHz）聽閾檢測，了解聽力隨年齡增長變化的趨勢。DAB免疫組化染色方法檢測calpain1、calpain2和calpastatin在聽皮層和蝸核組織的定位表達(dá)情況。Western blot檢測聽皮層、蝸核組織calpain1、calpain2和ca

3、lpastatin的蛋白表達(dá)。RT-PCR檢測聽皮層、蝸核組織mtDNA4834bp缺失突變率及calpain1、calpain2及calpastatin的基因表達(dá)情況。甲苯胺藍(lán)染色觀察不同月齡大鼠聽皮層、蝸核神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)。
　　結(jié)果：①相同頻率（4kHz、8kHz、16kHz、24kHz、32kHz），相同月齡D-半乳糖組與NS組相比ABR閾值差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。②免疫組化結(jié)果顯示，calpain1、calpa

4、in2和calpastatin在聽皮層及蝸核組織廣泛表達(dá)，calpain1主要表達(dá)于聽皮層和蝸核組織細(xì)胞質(zhì)與神經(jīng)軸突，calpain2和calpastatin主要表達(dá)于神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)。③相同月齡D-半乳糖組與NS組相比，聽皮層、蝸核組織中calpain1蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；聽皮層及蝸核組織中，相同月齡D-半乳糖組calpain2蛋白表達(dá)均高于NS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；聽皮層及蝸核在10月齡、16月齡時D-半乳糖組

5、calpastatin蛋白表達(dá)均低于NS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且蝸核組織在4月齡時D-半乳糖組亦低于NS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。④相同月齡D-半乳糖組與NS組相比，聽皮層、蝸核組織中calpain1 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；聽皮層及蝸核組織中，10月齡、16月齡D-半乳糖組calpain2 mRNA表達(dá)高于NS組，calpastatin mRNA表達(dá)低于NS組，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；但4月齡時D-半乳糖組calpai

6、n2 mRNA表達(dá)及calpastatin mRNA表達(dá)與NS組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。⑤聽皮層、蝸核組織中，4月齡、10月齡、16月齡D-半乳糖組mtDNA4834bp普遍缺失率均高于NS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。⑥聽皮層、蝸核組織甲苯胺藍(lán)染色顯示，隨著年齡的增長，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目減少，結(jié)構(gòu)紊亂，排列稀疏，形態(tài)改變（胞核固縮），大小不一，尼氏小體逐漸減少。
　　結(jié)論：1.在Calpain體系中calpain1并不參與聽皮