哮喘豚鼠心肌組織calpain表達(dá)的研究.pdf

1、支氣管哮喘(BA)是最常見的呼吸道疾病，是由多種因素共同參與的氣道慢性炎癥，臨床表現(xiàn)為支氣管壁平滑肌收縮使氣道發(fā)生可逆性痙攣和狹窄，嚴(yán)重病例可導(dǎo)致呼吸衰竭和心功能不全，病死率約為1％。BA所引起的心臟損害已經(jīng)引起人們的廣泛注意。Iskandar研究發(fā)現(xiàn)成人BA持續(xù)狀態(tài)可出現(xiàn)心肌缺血性損害，甚至誘發(fā)心功能障礙；Wickelgren證實(shí)平喘藥可減輕心肌炎癥；Lovis等進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重哮喘病人血漿中肌酸激酶、肌酸激酶同功酶、肌紅蛋白水平升

2、高。因此，BA可能造成心肌損害，但機(jī)制尚需進(jìn)一步研究探索。目前已有研究表明，鈣超載是心肌損害的主要發(fā)病機(jī)制之一，鈣超載可激活胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，其中以引起calpain的變化尤其重要。 本實(shí)驗(yàn)研究在建立豚鼠哮喘動(dòng)物模型的條件下，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)方法，觀察在哮喘后豚鼠心肌組織中calpain表達(dá)的變化情況，并同時(shí)觀察激素治療對(duì)calpain表達(dá)的影響，對(duì)比觀察光鏡下心肌病理改變與心肌組織calpain表達(dá)變化的關(guān)系，探討

3、calpain表達(dá)在哮喘后心肌損害中的作用機(jī)制，為臨床使用calpain抑制劑進(jìn)行疾病治療和預(yù)防提供新的理論依據(jù)。 材料和方法: 1、動(dòng)物模型制作及分組 將單只豚鼠置于半封閉的容器中，于第1、4、7d分別超聲霧化吸人1％卵蛋白3min使其致敏。然后將同等條件豚鼠隨機(jī)分為三組進(jìn)行研究，每組10只。①哮喘組：第2ld超聲霧化吸人2％卵蛋白5min誘喘，誘喘成功后24h取材；②激素治療組：誘喘前7d開始每只豚鼠面罩吸入

4、普米克令舒(每日兩次，0.25 mg/次)至誘喘當(dāng)天，誘喘成功后24h取材。③正常對(duì)照組：用生理鹽水替代卵蛋白及糖皮質(zhì)激素吸入(方法同上)。 2、動(dòng)物標(biāo)本取材 取材前，以1％戊巴比妥腹腔注射麻醉，將豚鼠仰臥位固定，以無菌器械解剖，整體取出心臟，將心臟沿房室交界切成兩段，取心室段。留取的心肌組織標(biāo)本，用4％多聚甲醛溶液固定，制作石蠟切片。 3、實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果觀察 (1)切片常規(guī)HE染色，光鏡觀察三組心肌組織

5、標(biāo)本病理學(xué)改變。 (2)免疫組織化學(xué)染色，在400倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，成像后利用MoticImages Advanced 3.1圖像分析系統(tǒng)對(duì)其染色強(qiáng)度進(jìn)行分析，結(jié)果用灰度值表示，用以觀察三組心肌組織calpain Ⅰ、calpain Ⅱ的表達(dá)強(qiáng)度。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 圖像分析檢測(cè)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析與顯著性檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)p=0.05。 結(jié)