哮喘豚鼠肺和骨髓中CCR3與CD34蛋白的表達(dá)及意義.pdf

1、目的: 觀察哮喘豚鼠模型不同時間骨髓、肺組織CCR3及CD34蛋白的表達(dá)變化和骨髓、外周血和肺組織EOS計(jì)數(shù)，探討在骨髓一循環(huán)一氣道通路中骨髓CCR3和CD34蛋白表達(dá)與哮喘的關(guān)系。 方法: 1.健康雄性豚鼠48只，以卵白蛋白(OVA)致敏和激發(fā)制作哮喘模型，隨機(jī)分為正常組(N組)、哮喘組(根據(jù)處死的時間點(diǎn)再將其細(xì)分為A、B、C、D、E組)，每組8只，在末次激發(fā)后，A、B、C、D、E組分別于30min、6h、12

2、h、24h、48h處死，N組于12h處死。 2.取豚鼠外周血、骨髓和肺組織，分別制備血涂片、骨髓涂片和肺組織切片； 3.外周血和骨髓涂片用Wright染色，光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)和EOS百分比； 4.肺組織切片HE染色，光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)和EOS百分比； 5.肺組織切片及骨髓涂片用CCR3和CD34多克隆抗體免疫組化染色，光學(xué)顯微鏡下分別計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞百分比； 6.統(tǒng)計(jì)分析，用Stata

3、7.0處理數(shù)據(jù)。 結(jié)果: 1.豚鼠外周血、骨髓和肺組織中EOS百分比分別為：N組(1.30±0.19)％、(1.26±0.19)％、(1.40±0.29)％；A組為(1.25±0.16)％、(1.41±0.23)％、(1.62±0.14)％；B組為(3.26±0.20)％、(4.81±0.68)％、(4.28±0.67)％；C組為(4.16±0.19)％、(5.21±0.39)％、(4.96±0.65)％；D組為(2.6

4、7±0.14)％、(1.83±0.47)％、(2.66±0.43)％；E組為(1.32±0.12)％、(1.25±0.29)％、(1.39±0.39)％。B、C、D組與N組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，A、E組與N組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，肺組織除外，A組較N組升高(P<0.05)。A、B、C、D、E組之間相比：B較A，EOS升高明顯(P<0.05)；C較B，肺組織EOS變化不大(P>0.05)，骨髓和外周血升高(

5、P<0.05)；D較C，E較D，EOS呈下降趨勢(P<0.05)。 2.豚鼠肺組織及骨髓CCR3和CD34多克隆抗體免疫組化染色陽性細(xì)胞百分比分別為：N組為(2.08±0.12)％、(2.06±0.14)％，(0.88±0.16)％、(1.67±0.35)％；A組為(2.15±0.10)％、(2.34±0.24)％，(1.23±0.30)％、(1.63±0.22)％；B組為(3.57±0.22)％、(4.25±0.30)％，(0

6、.87±0.20)％、(2.71±0.54)％：C組為(4.09±0.20)％、(4.09±0.11)％，(1.35±0.26)％、(3.92±0.61)％：D組為(2.91±0.26)％、(2.19±0.13)％，(0.85±0.11)％、(2.93±0.70)％：E組為(2.05±0.12)％、(2.06±0.17)％，(0.87±0.11)％、(1.71±0.22)％。CD34表達(dá)與N組相比：A組，肺組織CD34表達(dá)升高(P<0.

7、05)，骨髓內(nèi)雖數(shù)值略有下降，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異不明顯(P>0.05)：B組，肺組織CD34表達(dá)下降，骨髓內(nèi)開始升高(P<0.05)；C組，肺組織和骨髓內(nèi)CD34表達(dá)達(dá)到高峰(P<0.05)；D、E組逐漸下降，恢復(fù)到正常水平。 但是CCR3的表達(dá)則稍有不同：與N組相比骨髓及肺組織中CCR3，A組，開始升高(P<0.05)；B、C組，達(dá)到高峰(P<0.05)；D組，開始下降(P<0.05)；E組，基本恢復(fù)到正常水平；骨髓先升高，肺組織

8、隨著變化，但持續(xù)時間長于骨髓。 3.相關(guān)性分析結(jié)果提示：哮喘豚鼠EOS計(jì)數(shù)與CCR3蛋白的表達(dá)不論在肺組織還是骨髓都存在著線性關(guān)系(r=0.95，P<0.01；r=0.93，P<0.01)；EOS計(jì)數(shù)與CD34蛋白的表達(dá)在骨髓存在著線性關(guān)系(r=0.71，P<0.01)，而肺組織則無(r=0.27，P>0.05)；CCR3蛋白表達(dá)與CD34蛋白的表達(dá)在骨髓存在著線性關(guān)系(r=0.63，P<0.01)，而肺組織則無(r=0.28，

9、P>0.05)。另外，骨髓與外周血之間，EOS數(shù)的增加存在正相關(guān)(r=0.90，P<0.01)；在骨髓與肺組織之間，CCR3蛋白表達(dá)和EOS數(shù)的增加均存在正相關(guān)(r=0.88，P<0.01；r=0.91，P<0.01)，但CD34蛋白的表達(dá)無線性關(guān)系(r=20，P>0.05)。 結(jié)論: 1.哮喘豚鼠通過上調(diào)CD34+干細(xì)胞和EOS表面的CCR3蛋白的表達(dá)，調(diào)控了EOS從骨髓經(jīng)循環(huán)到氣道的浸潤全過程，促使CD34+干細(xì)胞分