烏司他丁在變應(yīng)性鼻炎中的治療作用及其與HO-1關(guān)系的研究.pdf

1、目的:
　　 變應(yīng)性鼻炎是臨床常見慢性疾病，研究表明，變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病不僅僅是傳統(tǒng)觀念所認(rèn)為的IgE介導(dǎo)的鼻黏膜Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，而且是易感個體接觸致敏變應(yīng)原后導(dǎo)致的包含IgE介導(dǎo)的炎癥遞質(zhì)的釋放和多種免疫活性細(xì)胞、Th1/Th2細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)失衡造成的鼻黏膜及黏膜下血管慢性炎癥性疾病。變應(yīng)性鼻炎全球發(fā)病率約為10％-25％，我國變應(yīng)性鼻炎的患病率約為9％-24.6％，而且隨著國家工業(yè)發(fā)展，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)

2、量。
　　 血紅素加氧酶(Hemeoxygenase，HO)是一種微粒體酶，是血紅素降解的起始酶和限速酶，HO-1為其誘導(dǎo)型，近期研究數(shù)據(jù)表明，HO-1基因作為一種保護(hù)性基因，其過表達(dá)有重要的生物學(xué)效應(yīng)比如，抗氧化應(yīng)激、抗炎、抗惡性細(xì)胞增生、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期活性以及對Treg細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用，HO-1對變應(yīng)性鼻炎具有保護(hù)作用。
　　 目前變應(yīng)性鼻炎的治療多采用激素類藥物，不良反應(yīng)多，烏司他丁源于人體，不良反應(yīng)少，臨床上已廣

3、泛應(yīng)用于胰腺炎、休克、全身炎癥反應(yīng)等的治療，效果顯著。烏司他丁能抑制炎癥介質(zhì)過度釋放，改善微循環(huán)、組織灌注，抑制組織細(xì)胞凋亡，同時可穩(wěn)定細(xì)胞膜，抑制蛋白質(zhì)分解代謝亢進(jìn)，清除體內(nèi)氧自由基，抑制IL-6、IL-8的過度生成及ICAM-1的表達(dá)等作用，但是該藥物在變應(yīng)性鼻炎中尚未應(yīng)用，在變應(yīng)性炎癥中的具體作用及機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。
　　 鑒于HO-1與烏司他丁均具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用，因此本實驗即通過體內(nèi)體外實驗，探討烏司他丁在變應(yīng)

4、性鼻炎發(fā)病過程中對小鼠及肥大細(xì)胞中HO-1蛋白含量表達(dá)的影響，并與激素類藥物相比較，烏司他丁是否通過誘導(dǎo)HO-1上調(diào)，達(dá)到治療作用，為進(jìn)一步闡述烏司他丁及HO-1在治療變應(yīng)性鼻炎中的機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 40只FVB系SPF級小鼠隨機(jī)分為空白對照組(con)、AR模型組(OVA)、地塞米松干預(yù)組(OVA+Dex)、烏司他丁干預(yù)組(OVA+UTI)，AR模型組采用10％卵清蛋白(ovalbumin，OVA

5、)進(jìn)行致敏，建立變應(yīng)性鼻炎小鼠模型，地塞米松干預(yù)組和烏司他丁干預(yù)組局部激發(fā)前腹腔注射地塞米松及烏司他丁。行為學(xué)觀察對模型進(jìn)行評價。末次激發(fā)后麻醉、取血，用ELISA法測定血清中IL-4、INF-γ、OVA特異性IgE含量;收集鼻腔灌洗液(Nasallavagefluid，NLF)，用于炎性細(xì)胞計數(shù);用WesternBlot法測定肺組織HO-1的蛋白含量;鼻組織固定、包埋，行HE染色和免疫組織化學(xué)染色，觀察鼻組織黏膜形態(tài)學(xué)改變和HO-1蛋

6、白的表達(dá)情況。同時體外培養(yǎng)小鼠肥大細(xì)胞分為正常組(con)、炎癥模型組（TNF-α組）、地塞米松干預(yù)組(TNF-α+Dex)、烏司他丁干預(yù)組（TNF-α+UTI），收集上清液檢測類胰蛋白酶活力，收集細(xì)胞分別行免疫熒光、ROS檢測、Westernblot、RT-PCR對烏司他丁在肥大細(xì)胞炎癥模型中的作用以及HO-1蛋白在各組肥大細(xì)胞中的表達(dá)情況進(jìn)行比較，并探討在肥大細(xì)胞中HO-1對烏司他丁是否存在時間及劑量依賴性。
　　 結(jié)果:<

7、br>　　 1、烏司他丁可以明顯改善變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻部癥狀
　　 AR模型組中10只小鼠均建模成功，鼻部出現(xiàn)變應(yīng)性鼻炎典型的癥狀，行為學(xué)觀察疊加記分均＞5分;與AR組相比，地塞米松干預(yù)組、烏司他丁干預(yù)組癥狀明顯減輕，疊加記分均＜5分;對照組沒有變應(yīng)性鼻炎癥狀。
　　 2、烏司他丁對變應(yīng)性鼻炎小鼠氣道黏膜有明顯的保護(hù)作用
　　 空白對照組鼻黏膜層次分明，無明顯炎癥改變;AR組鼻黏膜可見不同程度水腫，少量上皮細(xì)胞剝

8、脫，杯狀細(xì)胞體積大，腺體增生，黏膜下嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤。地塞米松干預(yù)組及烏司他丁干預(yù)組上述改變明顯減輕。
　　 3、烏司他丁可以明顯抑制變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻腔灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量
　　 AR模型組中嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)數(shù)明顯增多，與其他三組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。地塞米松和烏司他丁干預(yù)后，嗜酸性粒細(xì)胞明顯下降且與空白對照組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)
　　 4、烏司他丁可以逆轉(zhuǎn)變應(yīng)

9、性鼻炎小鼠Th1/Th2細(xì)胞因子失衡，降低血清中OVA特異性IgE含量
　　 AR組小鼠血清中IL-4、OVA特異性IgE含量明顯高于其他三組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且烏司他丁干預(yù)組與地塞米松干預(yù)組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。IFN-γ在AR組小鼠血清中含量明顯低于其他三組，存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，而空白對照組和烏司他丁干預(yù)組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 5、烏司他丁可以明顯抑制TNF-

10、α刺激后肥大細(xì)胞脫顆粒
　　 肥大細(xì)胞在給予TNF-α刺激后，類胰蛋白酶活力明顯增強(qiáng)，明顯高于正常組、烏司他丁干預(yù)組和地塞米松干預(yù)組且存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，而正常組、烏司他丁干預(yù)組和地塞米松干預(yù)組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 6、烏司他丁可以明顯抑制TNF-α刺激后肥大細(xì)胞中ROS的表達(dá)
　　 肥大細(xì)胞正常組中ROS處于低表達(dá)狀態(tài)，給予TNF-α刺激后，ROS在肥大細(xì)胞中的表達(dá)明顯增加，

11、當(dāng)給與地塞米松、烏司他丁干預(yù)后，ROS在肥大細(xì)胞中的表達(dá)明顯降低，但仍高于正常組。
　　 7、烏司他丁可以誘導(dǎo)變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻黏膜、肺組織以及肥大細(xì)胞中HO-1蛋白的表達(dá)。
　　 空白對照組與其余三組相比，HO-1蛋白的表達(dá)存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，且AR模型組與地塞米松干預(yù)組、烏司他丁干預(yù)組相比存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 8、烏司他丁誘導(dǎo)肥大細(xì)胞HO-1基因和蛋白的表達(dá)呈時間及劑量依賴性

12、>　　 隨著烏司他丁干預(yù)的時間增加，HO-1在肥大細(xì)胞中的表達(dá)逐漸增加，在4小時明顯增加。烏司他丁干預(yù)4小時，隨著烏司他丁濃度的增加，HO-1表達(dá)逐漸增加。
　　 結(jié)論:
　　 1、烏司他丁具有抑制小鼠氣道嗜酸性粒細(xì)胞增多，調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子失衡等作用，與地塞米松相比，同樣具有免疫調(diào)節(jié)作用，但抗炎作用優(yōu)于地塞米松。
　　 2、烏司他丁對肥大細(xì)胞炎癥模型具有抑制脫顆粒、抗氧化應(yīng)激作用。
　　 3、