烏司他丁對膿毒癥大鼠ET-1水平的影響及其腎臟保護作用.pdf

1、目的：膿毒癥(sepsis)是當(dāng)前ICU所面臨的棘手難題，死亡率高達18-29％，特別是由其誘發(fā)的膿毒癥性休克(septicshock)及多器官功能障礙綜合癥(Multiple organ dysfunctionsyndrome,MODS)，是危重癥的主要死亡原因之一。其中，19-51％的膿毒癥患者合并有急性腎功能衰竭(Acute renalfailure，ARF)，死亡率高達70％。內(nèi)皮素-1(Endothelin-1，ET-1)是至

2、今發(fā)現(xiàn)最強的縮血管物質(zhì)，在病理情況下，ET-1達高濃度時，則通過內(nèi)皮素受體引起明顯而持久的血管收縮效應(yīng)，將影響組織器官血液灌注，最終導(dǎo)致多器官功能障礙或衰竭。烏司他丁(ulinastatin)是在人尿液中發(fā)現(xiàn)的尿胰蛋白酶抑制劑(ulinary trypsin inhibitor,UTI)，新近研究表明，烏司他丁能夠阻斷全身炎癥反應(yīng)綜合癥(systemic inflammatoryresponse syndrome，SIRS)/MODS的

3、進展，顯示出較強的腎臟功能保護作用。本研究觀察相同時間、應(yīng)用相同劑量烏司他丁(10萬U/Kg)對嚴(yán)重感染大鼠血漿中ET-1濃度及腎臟組織中ET-1 mRNA水平的影響，并結(jié)合腎臟形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的變化，探討烏司他丁對腎臟的保護作用及其作用機制。 方法：本研究應(yīng)用盲腸結(jié)扎穿孔法(cecal ligation andpuncture，CLP)復(fù)制嚴(yán)重感染動物模型，頸總動脈置管觀察血壓及心率。取Sprague Dawley(SD)大鼠

4、96只，隨機分為3組：(1)假手術(shù)組(n=32)，只做頸總動脈置管和開關(guān)腹手術(shù)，不做CLP；(2)鹽水組(n=32)，CLP術(shù)后腹腔注射生理鹽水10ml/Kg)；(3)烏司他丁組(n=32)，CLP術(shù)后腹腔注射烏司他丁(10萬U/Kg)。每組又按時間點分為術(shù)前(n=8)、3h(n=8)、6h(n=8)、12h(n=8)四個亞組。每個亞組的動物按各亞組分組時間點由右頸總動脈置管處緩慢采血1ml，離心后留取上清液，于-80℃凍存，全部實驗結(jié)

5、束后采用液相平衡放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)測定血漿中ET-1含量。各亞組留取腎組織100mg，液氮保存，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-polymerase chain raction，RT-PCR)半定量檢測ET-1mRNA在腎臟的表達水平。3h、6h、12h亞組留取腎組織，采用HE染色法觀察腎臟形態(tài)學(xué)改變。3h亞組留取腎組織，采用透射電鏡觀察腎臟的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果采用SPS

6、S11.5統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果： 1.動物一般情況：假手術(shù)組大鼠麻醉清醒后活動基本如常；鹽水組大鼠術(shù)后均有嚴(yán)重的膿毒癥表現(xiàn)：活動明顯減少、嗜睡、呼吸急促及豎毛等，動物處死后剖腹可見腹腔積有血性滲出液，盲腸腫脹變黑、粘連，空腸腸管脹氣等表現(xiàn)；烏司他丁組大鼠上述膿毒癥表現(xiàn)較鹽水組輕。 2.腎組織形態(tài)學(xué)變

7、化：假手術(shù)組腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)基本正常；鹽水組腎小球皺縮明顯，腎小管上皮細胞變性、壞死脫落，腎小管囊腔擴張，管型形成，。腎間質(zhì)大量炎性細胞浸潤：烏司他丁組腎小球、腎小管變化較鹽水組減輕。 3.腎組織超微結(jié)構(gòu)變化：假手術(shù)組腎小球濾過膜完整，基底膜厚度均勻，上皮細胞足突排列有序，內(nèi)皮細胞形態(tài)正常，可見窗孔；近曲小管上皮細胞刷狀緣絨毛排列整齊，染色質(zhì)分布均勻，線粒體結(jié)構(gòu)正常；鹽水組腎小球基底膜部分增厚呈駝峰狀，部分足突細胞融合，部分血

8、管內(nèi)皮細胞增生變厚；近曲小管游離面微絨毛數(shù)量明顯減少，稀疏，排列不規(guī)則，線粒體部分或大部分嵴、少部分膜融合或消失；烏司他丁組腎小球及近曲小管超微結(jié)構(gòu)改變均較鹽水組輕。 4 血漿ET-1濃度變化：假手術(shù)組3h、6h、12h亞組血漿中ET-1濃度均高于術(shù)前(分別為329.065±43.731 vs 82.768±3.599pg/ml，P＜0.01；387.635±14.598 vs 82.768±3.599pg/ml，P＜0.01；391.

9、783±15.673 vs 82.7684±3.599pg/ml，P＜0.01)。鹽水組3h、6h、12h亞組血漿中ET-1濃度明顯高于假手術(shù)組(分別為456.363±24.048 vs 329.065±43.731pg/ml，P＜0.05；583.054±48.971 vs 387.635±14.598 pg/ml，P＜0.05；476.613±24.322vs391.783±15.673 pg/ml，P＜0.05)；CLP術(shù)后大鼠血

10、漿中ET-1濃度在6h達到高峰，CLP后3h、12h與6h相比有顯著性差異(分別為456.363±24.048 vs 583.054±48.971 pg/ml，P＜0.05；476.613±24.322 vs 583.054±48.971pg/ml，P＜0.05)。烏司他丁組3h、6h亞組大鼠血漿ET-1濃度明顯低于鹽水組(分別為336.828±22.330 vs 456.363±24.048pg/ml，P＜0.05；458.868±4

11、6.269vs 583.054±48.971 pg/ml，P＜0.05)，烏司他丁組12h亞組大鼠血漿ET-1濃度與鹽水組相比無顯著性差異(P＞0.05)。 5 腎臟ET-1 mRNA水平變化：假手術(shù)組3h、6h、12h亞組大鼠腎臟ET-1 mRNA水平均高于術(shù)前(分別為0.5624±0.045vs 0.140±0.005，P＜0.01；0.477±0.048 vs 0.140±0.005，P＜0.01；0.052±0.010

12、vs 0.140±0.005，P＜0.05)。鹽水組3h、6h、12h亞組腎臟中ET-1 mRNA水平明顯高于假手術(shù)組(分別為0.770±0.039 vs 0.562±0.045，P＜0.05；0.694±0.064 vs0.477±0.048，P＜0.05；0.881±0.028 vs 0.052±0.010，P＜0.01)：CLP后3h大鼠腎臟ET-1 mRNA水平升高，6h有所下降，12h再次升高，CLP后3h與6h相比差別無顯著

13、性(p＞0.05)，12h與6h相比有顯著性差異(0.881±0.028 vs 0.694±0.064.P＜0.05)。烏司他丁組3h、6h、12h亞組大鼠腎臟ET-1mRNA水平明顯低于鹽水組(分別為0.437±0.046 vs0.770±0.039，P＜0.01；0.382±0.051 vs 0.694±0.064，P＜0.01；0.553±0.084 vs 0.88 1±0.028，P＜0.05)。結(jié)論： 1.本實驗采用C

14、LP法可成功復(fù)制由腹腔感染導(dǎo)致的膿毒癥大鼠動物模型。 2.損傷和感染均可引起大鼠血漿中ET-1濃度及腎臟ET-1mRNA水平的升高，膿毒癥大鼠血漿ET-1濃度在6h達高峰，腎臟ET-1 mRNA水平3h即出現(xiàn)升高，6h有所下降，12h再次升高。膿毒癥大鼠CLP術(shù)后3h即出現(xiàn)腎臟形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的改變。 3.烏司他丁可延緩膿毒癥的進程，對腎臟具有一定保護作用。烏司他丁可明顯改善膿毒癥大鼠的臨床表現(xiàn)及體征，減輕膿毒癥所致的腎