用于結(jié)腸癌個(gè)性化治療的溶瘤腺病毒載體的構(gòu)建：個(gè)性化治療之一.pdf

1、結(jié)腸癌是我國常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率與死亡率在我國各類腫瘤中排在第五位，僅次于胃癌、肝癌、食管癌、肺癌等惡性腫瘤，并隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的改變呈逐年上升趨勢。結(jié)腸癌多發(fā)于中老年人群，但是，目前的研究顯示，結(jié)腸癌的發(fā)病年齡漸趨年輕化，我國結(jié)腸癌患者的發(fā)病年齡平均在45歲左右，較歐美要提前15年，而青年癌癥患者中結(jié)腸癌占23.7％。 基因-病毒病毒療法由于結(jié)合了病毒的擴(kuò)增能力和基因的殺傷作用，從而成為結(jié)腸癌生物治療的研究熱點(diǎn)。在運(yùn)載

2、病毒的篩選中，腺病毒載體以其宿主范圍廣、可感染分裂和非分裂細(xì)胞、高滴度、易純化、外源基因裝載容量大等優(yōu)點(diǎn)，越來越廣泛地被應(yīng)用于腫瘤治療。本課題組已經(jīng)成功構(gòu)建了溶瘤腺病毒ZD55系統(tǒng)，該系統(tǒng)由野生型腺病毒刪除E1B55Kd基因改造而來，E1B55Kd蛋白在病毒擴(kuò)增過程中負(fù)責(zé)拮抗p53。野生型腺病毒感染正常細(xì)胞會(huì)激活細(xì)胞內(nèi)的p53途徑，此時(shí)E1B55Kd蛋白抑制p53，保證宿主細(xì)胞的存活，為病毒的復(fù)制維持提供一個(gè)穩(wěn)定的微環(huán)境。而刪除掉E1B

3、55Kd基因后，由p53誘導(dǎo)，機(jī)體迅速清除受ZD55感染的正常細(xì)胞，由于多數(shù)腫瘤細(xì)胞內(nèi)均存在p53途徑缺失，ZD55系統(tǒng)能選擇性的在腫瘤細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增。但是大多數(shù)腺病毒載體都存在靶向性差，毒副作用強(qiáng)等缺點(diǎn)，極大的限制了溶瘤腺病毒的應(yīng)用。因此，進(jìn)一步提高溶瘤腺病毒的靶向性，降低對細(xì)胞的毒性成為溶瘤腺病毒開發(fā)的關(guān)鍵。目前，提高溶瘤腺病毒靶向性的方法主要有兩種：其一改變病毒的外殼蛋白，使病毒只能感染腫瘤細(xì)胞；其二調(diào)控病毒的增殖，使病毒只能在腫瘤細(xì)

4、胞內(nèi)復(fù)制。后者最常用的方法是修改病毒基因組，或是利用一些腫瘤特異性的啟動(dòng)子來調(diào)控病毒DNA的復(fù)制，使病毒只能選擇性的在腫瘤細(xì)胞內(nèi)增殖。 以此理論為基礎(chǔ)，我們利用癌胚抗原啟動(dòng)子替換ZD55的E1A的啟動(dòng)子，成功構(gòu)建出溶瘤腺病毒ZD55-CEA。CEA具有較強(qiáng)的結(jié)腸癌特異性，是結(jié)腸癌診斷及預(yù)后的重要指標(biāo)，研究顯示結(jié)腸癌病人血清中CEA的含量高達(dá)60ng/mL。為了進(jìn)一步提高結(jié)腸癌的治療效果，本研究將大腸癌負(fù)相關(guān)基因ST13插入溶瘤腺

5、病毒ZD55-CEA中，構(gòu)建了攜帶ST13基因表達(dá)框的溶瘤腺病毒CEA-E1A-ZD55-E1B-ST13。和傳統(tǒng)的殺傷基因相比，ST13的靶向性更為專一，目前的研究顯示，各類腫瘤中只有大腸癌的發(fā)生與ST13的表達(dá)水平存在負(fù)相關(guān)性。我們針對ZD55-CEA的靶向性及CEA-E1A-ZD55-E1B-ST13對不同細(xì)胞的殺傷效果作了體外試驗(yàn)，結(jié)果顯示ZD-CEA在結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)能夠快速的增殖，而在正常細(xì)胞內(nèi)無明顯變化，在CEA非高表達(dá)的腫瘤