雷替曲塞對胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究雷替曲塞對胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響，并對有關(guān)作用的特點(diǎn)及其機(jī)制進(jìn)行深入探討，為雷替曲塞治療胃癌的臨床研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論支持。
　　方法：
　?。?）體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細(xì)胞，采用CCK-8法檢測雷替曲塞在不同濃度和作用時(shí)間下對各組細(xì)胞的增殖抑制作用。（2）通過Hoechst33258熒光染色法，觀察雷替曲塞對胃癌細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的改變。（3）采用流式細(xì)胞儀法，檢

2、測雷替曲塞作用胃癌細(xì)胞后凋亡程度變化及細(xì)胞周期分布阻滯情況；并進(jìn)一步分析雷替曲塞對線粒體膜電位及活性氧含量的影響。（4）Western Blot法檢測雷替曲塞應(yīng)用對凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、cyt-c和caspase-3表達(dá)的影響。（5）構(gòu)建胃癌裸鼠移植瘤模型，觀察不同劑量雷替曲塞在體內(nèi)對胃癌生長的抑制作用；免疫組化法檢測對照組與不同劑量實(shí)驗(yàn)組之間Ki67、PCNA表達(dá)的差異；TUNEL法觀察腫瘤組織中胃癌細(xì)胞的凋亡情況；并通過W

3、estern Blot法檢測Bax和caspase-3蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　（1）雷替曲塞對人胃癌SGC-7901細(xì)胞具有增殖抑制作用，呈現(xiàn)明顯的時(shí)間和劑量依賴性。（2）雷替曲塞能夠誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，Hoechst33258染色可見核固縮、核碎裂及凋亡小體等典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化。（3）雷替曲塞明顯地阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，而使較少的細(xì)胞停留在G2/M期。（4）雷替曲塞可使細(xì)胞線粒體膜電位下降、活性氧含

4、量升高。（5）雷替曲塞能夠增強(qiáng)細(xì)胞中Bax、cyt-c、caspase-3蛋白的表達(dá)，并抑制Bcl-2蛋白的表達(dá)。（6）通過建立胃癌裸鼠移植瘤模型，發(fā)現(xiàn)雷替曲塞能夠顯著抑制胃癌裸鼠移植瘤的生長；免疫組化結(jié)果顯示，雷替曲塞抑制了移植瘤組織中Ki67、PCNA表達(dá)水平；TUNEL法驗(yàn)證了雷替曲塞具有誘導(dǎo)移植瘤細(xì)胞凋亡的作用，其可能與增強(qiáng)Bax、caspase-3蛋白的表達(dá)水平有關(guān)。
　　結(jié)論：
　?。?）體外實(shí)驗(yàn)中，雷替曲塞對胃

5、癌細(xì)胞具有一定的增殖抑制作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，并使細(xì)胞線粒體膜電位下降、活性氧含量升高；其機(jī)制可能是通過上調(diào)Bax、cyt-c、caspase-3表達(dá)、下調(diào)Bcl-2表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。（2）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，雷替曲塞能夠抑制胃癌裸鼠移植瘤的生長，降低Ki67、PCNA的表達(dá)；同時(shí)通過提高Bax、caspase-3的表達(dá)來誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。（3）本研究為雷替曲塞治療胃癌提供了實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)，亦為今后開展相關(guān)臨床研究提供了理論依