硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞增殖抑制及凋亡誘導(dǎo)的作用及分子機(jī)制，為硫化砷抗腫瘤的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：選取P53不同狀態(tài)AGS（P53野生型）及MGC803（P53突變型）胃癌細(xì)胞株，人正常永生化胃粘膜GES-1細(xì)胞株，MTT法檢測(cè)硫化砷作用24，48，72 h對(duì)其增殖能力的影響；DAPI染色（DAPI Staining）法觀察硫化砷處理胃癌細(xì)胞后細(xì)胞核變化情況； Annexin V-FITC/PI雙染于流式細(xì)

2、胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡分析；Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)增殖及凋亡相關(guān)蛋白P53、MDM2、Bax、Bcl-2的變化情況；RT-PCR法檢測(cè)增殖及凋亡相關(guān)基因P53、MDM2、Bax、Bcl-2等mRNA的變化情況；P53抑制劑PFT-α與硫化砷共同作用于細(xì)胞，抑制P53引起的轉(zhuǎn)錄活性，觀察P53介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄依賴性途徑在硫化砷誘導(dǎo)的增殖抑制及凋亡中發(fā)揮的作用。
　　結(jié)果： MTT結(jié)果顯示，硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖抑制呈時(shí)間、

3、劑量依賴性。與AGS細(xì)胞相比，MGC803細(xì)胞更為耐藥。經(jīng)硫化砷處理24 h后，AGS、MGC803、GES-1細(xì)胞的IC50值分別為：2.69±0.26,3.26±0.16,6.27±0.86μM。在P53野生型AGS細(xì)胞中，硫化砷引起的凋亡與增殖抑制作用與P53及其下游基因MDM2、Bax蛋白水平的上調(diào)及Bcl-2蛋白水平的下調(diào)有關(guān)。應(yīng)用P53抑制劑PFT-α提前處理細(xì)胞以抑制P53的轉(zhuǎn)錄活性，低劑量（1.25μM以下）硫化砷對(duì)AG

4、S細(xì)胞引起的細(xì)胞毒作用消失，并且 Bax、Bcl-2的蛋白水平回復(fù)至未經(jīng)處理的水平，提示P53介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄依賴性途徑在硫化砷對(duì)AGS細(xì)胞引起的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要的作用。在P53突變型的MGC803細(xì)胞中，硫化砷引起的細(xì)胞凋亡及Bax/Bcl-2比值的增高并不伴隨 P53蛋白水平的上調(diào)，P53抑制劑也未能顯示對(duì)MGC803的毒性保護(hù)作用，提示P53介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄依賴性通路在硫化砷誘導(dǎo)的MGC803細(xì)胞凋亡中并不是一個(gè)主要途徑。
　　結(jié)論：