蟲草素對胃癌細胞凋亡的機制研究.pdf

1、目的：胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，即使實施根治性手術(shù)，五年生存率仍不理想。術(shù)后的高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率是影響生存時間的主要原因?；熢谖赴┲委熤邪l(fā)揮著舉足輕重的作用，但由于腫瘤細胞對傳統(tǒng)化療藥物的耐藥性，使得傳統(tǒng)化療藥物治療胃癌的效果不理想。目前，中醫(yī)藥用于惡性腫瘤的治療受到越來越多的關(guān)注。蟲草素是蟲草中核苷類主要活性成分，同時也是蟲草的主要活性成分，其具有多種生物活性，如抗腫瘤、抑菌、抑制病毒等作用。研究證明蟲草素能抑制mRNA合成，誘導(dǎo)細胞

2、凋亡，使細胞分化，從而對多種腫瘤細胞的生長有抑制作用。本課題以胃癌細胞株BGC823及MGC-803為研究對象，探討蟲草素對人胃癌細胞體外生長及抑制及誘導(dǎo)凋亡的作用及其機制，為蟲草素臨床治療胃癌提供實驗依據(jù)。
　　方法不同濃度蟲草素作用于胃癌細胞不同時間后，用MTT法檢測蟲草素對于胃癌細胞的生長抑制作用；運用細胞克隆形成實驗，觀察不同濃度蟲草素影響胃癌細胞的克隆形成能力；運用流式細胞術(shù)檢測細胞周期細胞，Western blot法檢

3、測細胞周期相關(guān)蛋白的表達；用AnnexinV-FITC/PI雙染色法流式細胞儀檢測細胞凋亡率，再運用熒光顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學(xué)變化；Western blot方法檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達。
　　結(jié)果蟲草素對于胃癌細胞有明顯的生長抑制作用，呈明顯的時間和濃度效應(yīng)關(guān)系（P<0.05）。蟲草素呈劑量依賴性的誘導(dǎo)胃癌細胞株阻滯于S期；Western blot法檢測細胞周期相關(guān)蛋白的表達提示cyclin A和 cyclin B1的表達下調(diào)，c

4、yclin D1的表達上調(diào)，提示蟲草素通過誘導(dǎo)這些細胞阻滯于S期。流式細胞儀檢測細胞早期凋亡率及晚期凋亡率與對照組相比較具有有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，且隨著藥物濃度的提高,誘導(dǎo)細胞凋亡的作用越明顯。運用熒光顯微鏡下觀察蟲草素處理的胃癌細胞顯示細胞體積變小，染色質(zhì)濃縮并聚集于核膜下呈境界分明的顆粒狀塊或月牙形。Western blot方法檢測凋亡相關(guān)蛋白發(fā)現(xiàn)Bcl-2, NF-κB蛋白表達減少，而Caspase-3、Caspase-9