體外研究化學(xué)發(fā)光法篩選人血清PON的激動劑和抑制劑.pdf

1、對氧磷酶(PON)是一種定位在高密度脂蛋白(HDL)上的內(nèi)酯酶,可以保護低密度脂蛋白(LDL)過氧化,人體內(nèi) PON的活性水平涉及很多疾病的發(fā)病機制,因而研究藥物對PON的作用有重要的意義。吖啶酯類化合物9-(4-甲基苯基)氧羰基-10甲基吖啶酯三氟磺酸鹽(CPOCMA)已經(jīng)被證實是人血清對氧磷酶的特異性水解底物,具有良好的化學(xué)發(fā)光性能,因此本課題以CPOCMA為底物,體外研究化學(xué)發(fā)光法從不同金屬離子和中藥中篩選血清PON激動劑和抑制劑

2、,為臨床用藥提供一定的指導(dǎo)意義。
　　本課題以已知的PON激動劑Ca2+作為研究對象,首先將本課題創(chuàng)新的化學(xué)發(fā)光法和常規(guī)的以乙酰苯酚為底物的紫外分光光度法進(jìn)行方法學(xué)對照,顯示結(jié)果一致,證實了以CPOCMA為底物的化學(xué)發(fā)光法在測定血清PON活性應(yīng)用中的可行性。
　　為研究不同金屬離子對血清PON的影響,本課題從離子半徑、電荷及重金屬毒性等方面考慮,有規(guī)律的選擇了Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Al3+, F

3、e3+, Zn2+, Cu2+, Pb2+等10種金屬離子作為研究對象,在血藥濃度下測定各金屬離子對血清PON的作用,結(jié)果顯示:①Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+, Fe3+等金屬離子對血清PON具有激動作用,且激動作用大小依次為:Ca2+>Fe3+>Na+>K+>Li+>Zn2+>Mg2+;②Cu2+, Pb2+, Al3+等金屬離子對血清PON有抑制作用,且抑制作用大小依次為:Al3+>Pb2+>Cu2+

4、。
　　為進(jìn)一步研究金屬離子濃度變化對血清PON的影響,選取了一系列濃度范圍的上述金屬離子,測定其對血清PON作用的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn):①對于常見的Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+等金屬離子(0.1-10.0mmol/L),不管濃度變化,均為PON激動劑,在濃度大于6mmol/L時,Mg2+的激動作用大于Ca2+;②Fe3+(1.0-80.0μmol/L)隨濃度增大,對PON的激動作用也增大,大于20μmol/L時激動

5、作用有所減小,最大激動作用介于二價和一價金屬離子之間;③ Zn2+(1.0-80.0μmol/L)在10-20μmol/L之間,對血清PON有激動作用,其余濃度下對血清PON的作用不明顯;④對于一些微量金屬離子(1.0-80.0μmol/L): Cu2+, Pb2+, Al3+等,大于20μmol/L時,Pb2+的抑制作用最大;⑤主族金屬離子在低濃度時(<6.0mmol/L)對血清 PON的激動作用與離子電荷和半徑呈正相關(guān),濃度>6.0

6、mmol/L時,對血清PON的激動作用與離子電荷和濃度相關(guān),與半徑無關(guān)。
　　由于化學(xué)發(fā)光法能測定許多紫外分光光度法所不能測定的有較強紫外吸收干擾的藥物,本課題還運用以CPOCMA為底物的化學(xué)發(fā)光法對丹參、虎杖、生姜和紅花四種中藥的粗提液對PON的活性影響進(jìn)行了測定,初步篩選出 PON激動劑生姜和紅花;進(jìn)一步從紅花中分離并篩選出了PON激動組分紅花水提液和揮發(fā)油,并試從紅花中分離羥基紅花黃色素 A和紅花紅色素,為化學(xué)發(fā)光法從紅花中