PON1化學(xué)發(fā)光底物的合成、性質(zhì)及應(yīng)用研究.pdf

1、對氧磷酶（PON）屬于芳香酯酶。芳香酯酶的活性與人的多種發(fā)病相關(guān)，在醫(yī)學(xué)上，是腫瘤、心血管病、肝臟等疾病的病變指標(biāo)之一，因而探測芳香酯酶的活性并研究PON1底物，對于疾病的早期診斷、及時預(yù)警有非常重要的臨床意義。吖啶酯是一類較為常見的化學(xué)發(fā)光試劑，并且可以作為PON1的底物來測定PON1酶的活性，因此本課題合成四種新型吖啶酯，作為底物來考察其發(fā)光性能，評價底物的選擇性，并用吖啶酯作為底物建立化學(xué)發(fā)光法，篩選能夠激動PON1酶的中藥有效成

2、分。
　　通過對9-（4-對氯苯氧羰基）-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽（化合物1）的結(jié)構(gòu)修飾研究，合成了9-（對叔丁基苯氧羰基）-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽（化合物2）、9-苯氧羰基-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽（化合物3）、9-（4-甲基苯氧羰基）-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽（化合物4）、9-（2,4-二甲基苯氧羰基）-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽（化合物5）等四種高量子產(chǎn)率的新型吖啶酯。其中化合物5整個化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在4s內(nèi)

3、完成，其他的四種吖啶化合物整個化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在0.8s內(nèi)完成；五種吖啶酯化學(xué)發(fā)光效率大小如下：3>5>4>2>1，苯環(huán)上沒有取代基的吖啶酯具有更高的化學(xué)發(fā)光效率，而苯環(huán)上的對位被取代的吖啶酯的化學(xué)發(fā)光效率是有所降低。
　　五種吖啶酯濃度均為4.02×10-11 mol·L-1，緩沖液(Tris-HCl) pH7.5時22min內(nèi)表現(xiàn)出了良好的自身穩(wěn)定性；五種吖啶酯以乙腈作為溶劑，配成濃度為1.25×10-5 mol·L-1母液液在4

4、°C的冰箱里保存12周后，它們有不同程度的水解，濃度為1.25×10-5 mol·L-1的一級儲備液的穩(wěn)定性順序為5>2>4>3>1，其中化合物5自身穩(wěn)定性最好，而化合物1的自身穩(wěn)定性最差。
　　以五種吖啶酯作為化學(xué)發(fā)光底物，考察了rhPON1和人體血清PON1對底物的催化水解曲線，它們的速率常數(shù)大小順序均為1>3>4>2>5，rhPON1和人體血清PON1催化水解吖啶酯的速率常數(shù)順序一致；其中化合物5表現(xiàn)出了最好的穩(wěn)定性，化合物

5、5酚環(huán)上具有兩個甲基，增加了化合物的空間位阻，從而增強(qiáng)了化合物的穩(wěn)定性。
　　以五種吖啶酯作為化學(xué)發(fā)光底物，考察了酯酶D和脂肪酶對對人體血清PON1催化水解吖啶酯底物的干擾作用，其中酯酶D和脂肪酶的濃度rhPON1濃度大于300倍，從結(jié)果可知，rhPON1,脂肪酶和酯酶D催化水解五種吖啶酯的能力相似。這表明，酯酶D和脂肪酶跟rhPON1相比對吖啶酯底物具有較差的催化水解活性。Na+和Ca2+PON1是激動劑，它們提高了底物的特異性

6、和靈敏度。EDTA作為PON1抑制劑來抑制血清中PON1的特異活性，其中化合物5的特異性為最佳。
　　運用以9-4-甲基苯氧羰基-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽作為底物的化學(xué)發(fā)光法測定生姜丹參、川芎、三七、人參和川芎六種中藥不同溶劑提取物對血清PON1的活性影響。初步結(jié)果表明:生姜、人參和三七對血清PON1有激動作用；川芎由于本身具有發(fā)光的性質(zhì)，對測定有較大的干擾，當(dāng)濃度調(diào)到很低時，它對血清PON1沒有顯示激動作用；虎杖由于自身存在