磷酸鈣納米顆粒作為蛋白質(zhì)載體的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)能催化生化反應(yīng)，組成受體和細(xì)胞膜通道，提供細(xì)胞骨架支持，在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運分子，是體內(nèi)功能最多樣化的生物大分子。蛋白質(zhì)藥物廣泛的應(yīng)用于癌癥治療、疫苗、再生藥物、治療基因缺陷疾病和成像等領(lǐng)域。然而，由于蛋白質(zhì)特有的性質(zhì)，比如較大的體積、不同的表面電勢、易受損傷的三級結(jié)構(gòu)，將目標(biāo)蛋白運載入細(xì)胞內(nèi)有很多阻礙。所以蛋白質(zhì)運載策略中最大的挑戰(zhàn)是在不破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和生物活性的前提下將蛋白運載到細(xì)胞質(zhì)。大多數(shù)蛋白質(zhì)運載體系依賴于細(xì)胞的內(nèi)吞作用。因此，

2、被運載的目標(biāo)蛋白很容易在內(nèi)體/溶酶體弱酸性的采環(huán)境中被降解，進(jìn)而無法到達(dá)目標(biāo)的亞細(xì)胞區(qū)域發(fā)揮作用。基于以上原因，我們用了一種pH敏感的納米生物材料，來避免目標(biāo)蛋白在內(nèi)體/溶酶體中降解，并有效的釋放到細(xì)胞質(zhì)中。磷酸鈣納米顆粒是pH敏感的蛋白質(zhì)運載體系，有很好的生物相容性和生物降解性。在本論文中，我們以磷酸鈣納米顆粒為基礎(chǔ)建立了一種有效的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)運載體系。
　　我們設(shè)計了一種簡單低成本的磷酸鈣納米顆粒制備方法，檢測了納米顆粒各方面

3、的性質(zhì)，包括顆粒粒徑、顆粒形態(tài)、載藥率、包封率、pH敏感性質(zhì)和穩(wěn)定性。磷酸鈣納米顆粒有很好的分散性并保持穩(wěn)定的粒徑。在內(nèi)體/溶酶體的弱酸性環(huán)境中，蛋白能很快從顆粒上釋放，而在生理環(huán)境(pH=7.4)中能保持穩(wěn)定。
　　然后，我們進(jìn)一步研究了磷酸鈣納米顆粒的細(xì)胞攝取、蛋白在細(xì)胞內(nèi)的釋放情況以及顆粒上負(fù)載蛋白的生物活性。一方面，我們通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)來研究磷酸鈣納米顆粒的細(xì)胞攝取情況;結(jié)果表明顆粒能成功有效的被細(xì)胞攝取。由于內(nèi)