用于疫苗輸送的功能化磷酸鈣納米載體的制備及研究.pdf

1、疫苗在預(yù)防人類疾病方面有著重要的意義，疫苗佐劑的出現(xiàn)解決了某些疫苗低免疫原性的問題，并且為少劑量接種提供了可能，開發(fā)更為安全、有效、廣譜的免疫佐劑，是擴(kuò)大疫苗應(yīng)用范圍、研究新型疫苗的重要環(huán)節(jié)。本論文利用免疫活性多糖—甘露聚糖(mannan)為穩(wěn)定劑制備了一種磷酸鈣納米載體，該納米載體在實(shí)現(xiàn)疫苗傳遞的同時(shí)還可作為疫苗佐劑，用于增強(qiáng)免疫應(yīng)答反應(yīng)。作為抗原傳遞系統(tǒng)該載體為疫苗的新型佐劑研究提供了思路。
　　該課題采用高碘酸鈉(NaIO4

2、)氧化甘露聚糖（mannan, MN）得多醛基氧化甘露聚糖，與帕米膦酸二鈉(Pa)經(jīng)還原胺化反應(yīng)，獲得帶有磷酸根的甘露聚糖(Pa-MN)，以此產(chǎn)物為穩(wěn)定劑，依靠磷酸根與鈣離子的靜電吸附作用，通過共沉淀法制備了功能化磷酸鈣(CAP)納米粒。核磁共振、元素分析、與羥基磷灰石的結(jié)合、導(dǎo)電率測定等實(shí)驗(yàn)證明甘露聚糖-雙磷酸鹽復(fù)合物(Pa-MN)的成功合成，與伴刀豆球蛋白A(ConA)的特異性結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明，合適的修飾度可保持甘露聚糖結(jié)構(gòu)的完整性。通

3、過動(dòng)態(tài)光散射(DLS)粒度儀、掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡(TEM)表征發(fā)現(xiàn)，該功能化納米粒平均粒徑為130.4±1.9nm，且分散性良好。
　　BCA法和SDS-PAGE凝膠電泳用于測定抗原的裝載量，結(jié)果表明該納米粒對抗原的包封率為52.1％，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示制備的磷酸鈣納米粒具有良好的細(xì)胞相容性，在細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)中該納米載體可提高細(xì)胞對抗原的攝取率，Elisa實(shí)驗(yàn)測定小鼠血清中OVA特異性抗體IgG，IgG1,I