MicroRNA-21參與上皮性卵巢癌的化療耐藥及其作用機制.pdf

1、第一部分上皮性卵巢癌患者血清 microRNA-21的水平及其臨床意義研究
　　目的：檢測上皮性卵巢癌化療耐藥及化療敏感患者血清中microRNA-21的表達，并探討其評估上皮性卵巢癌化療耐藥及預后的可行性。
　　方法：采用探針型real-time PCR技術檢測和比較20例上皮性卵巢癌患者和10例正常人血清標本中microRNA-21的表達，并分析血清 microRNA-21水平與上皮性卵巢癌患者化療耐藥及其臨床病理特征的

2、相關性。
　　結果：正常人、上皮性卵巢癌化療敏感和化療耐藥患者血清中microRNA-21的相對表達量分別為0.573±0.318、2.606±1.057、26.766±26.710，上皮性卵巢癌化療敏感和化療耐藥患者血清中miR-21的相對表達量均顯著高于正常人血清中miR-21的相對表達量(P<0.05)，而上皮性卵巢癌化療耐藥患者血清中miR-21表達顯著高于上皮性卵巢癌化療敏感患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)?；熌?/p>

3、藥患者血清miR-21表達水平與其手術-病理分期無明顯差異（P>0.05），化療耐藥患者血清miR-21的表達水平與是否發(fā)生淋巴結轉移無明顯相關性（P>0.05）。
　　結論：上皮性卵巢癌化療耐藥患者血清 microRNA-21水平顯著升高，提示其可能是上皮性卵巢癌化療耐藥的潛在腫瘤標志之一。
　　第二部分MicroRNA-21通過負性調節(jié)PTEN參與上皮性卵巢癌的順鉑耐藥
　　目的:通過檢測卵巢癌細胞株SKOV3/D

4、DP與SKOV3中miR-21的差異性表達，探討miR-21在與上皮性卵巢癌的順鉑耐藥關系。并進一步檢測PTEN在mRNA水平和蛋白水平的表達，探討miRNA-21促進上皮性卵巢癌順鉑耐藥的可能作用機制。
　　方法：（1）MTT法檢測SKOV3/DDP相對于其敏感細胞株對順鉑的耐藥性和耐藥指數(shù)；（2）采用real-time PCR技術檢測miRNA-21和PTEN mRNA在SKOV3及SKOV3/DDP中的差異性表達；（3）we

5、stern blot檢測PTEN蛋白在SKOV3及SKOV3/DDP細胞中的表達；（4）SKOV3細胞株和SKOV3/DDP細胞株分別用脂質體2000轉染miR-21 mimics及inhibitors。并分別設置陰性對照組。轉染后，MTT法檢測SKOV3及SKOV3/DDP細胞的耐藥性。real time PCR測定SKOV3及SKOV3/DDP中miR-21和PTEN mRNA的表達量。western blot的方法檢測PTEN蛋白

6、在卵巢癌敏感及耐藥細胞株中的表達。
　　結果：（1）順鉑對SKOV3及SKOV3/DDP細胞的 IC50值分別為5.351μ mol/L和22.488μ mol/L，兩者之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），耐藥指數(shù)為4.2倍。（2）從 SKOV3及 SKOV3/DDP中提取總 RNA，real-time PCR的檢測證實 miR-21在SKOV3/DDP中的相對表達量顯著高于其在 SKOV3細胞中的表達。而 PTEN mRNA在

7、SKOV3及SKOV3/DDP細胞中的表達無明顯差異（P>0.05）（3）western blot檢測發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白在SKOV3細胞中表達量高于其在SKOV3/DDP細胞的表達（4）real-time PCR檢測證實SKOV3+mimics細胞中miRNA-21的相對表達量較陰性對照組升高了344倍，而SKOV3/DDP+inhibitor細胞中miRNA-21相對表達量約為陰性對照組的0.109倍，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)

8、。（5）real-time PCR檢測證實 SKOV3+mimics細胞中PTEN mRNA的相對表達量較陰性對照組明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而SKOV3/DDP+inhibitor細胞中PTEN mRNA的相對表達量與陰性對照組PTEN mRNA的相對表達量無明顯差異（P>0.05）。PTEN mRNA在 SKOV3+nc組和SKOV3/DDP+nc組的相對表達量亦無明顯差異（P>0.05）。（7）轉染后，順鉑對SK

9、OV3+nc和SKOV3+mimics細胞的 IC50值分別為5.205μ mol/L和25.763μ mol/L，SKOV3+mimics細胞較陰性對照組耐藥倍數(shù)升高約4.9倍。順鉑對SKOV3/DDP+nc和SKOV3/DDP+inhibitor細胞的IC50值分別為21.914μ mol/L和15.524μ mol/L，SKOV3/DDP+inhibitor細胞耐藥倍數(shù)約為陰性對照組的0.7倍。（8）轉染后，Western blo