卵巢上皮性癌順鉑化療耐藥機(jī)制及逆轉(zhuǎn)策略的研究.pdf

1、目的:研究卵巢上皮性癌組織和細(xì)胞系中ERCC1、BRCA1、hMLH1、HSP27基因蛋白的表達(dá)與順鉑敏感性的關(guān)系;觀察米非司酮在體內(nèi)外增強(qiáng)順鉑對(duì)卵巢癌耐藥細(xì)胞的抗癌作用并分析其作用機(jī)制以及探討RNA干擾ERCC1基因后卵巢癌細(xì)胞順鉑敏感性的變化.方法:應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)58例卵巢癌組織中4種蛋白的表達(dá)情況并分析其與順鉑耐藥的關(guān)系,應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)4種基因mRNA在卵巢癌細(xì)胞ES-2、SKOV3、COC1、COC1/DDP中的表

2、達(dá)并觀察不同濃度的順鉑作用24小時(shí)后基因的變化;應(yīng)用MTT法觀察在卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞COC1/DDP米非司酮對(duì)順鉑的增敏作用,并通過流式細(xì)胞技術(shù)和RT-PCR、western blot分析其發(fā)揮作用的機(jī)制,同時(shí)建立COC1/DDP細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型,在體內(nèi)觀察米非司酮對(duì)順鉑的增敏作用;體外合成特異性雙鏈小分子RNA,轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞ES-2、SKOV3、COC1/DDP,通過RNA干擾技術(shù)關(guān)閉ERCC1基因,通過RT-PCR、west

3、ern blot和免疫細(xì)胞化學(xué)法分析RNA干擾效果,應(yīng)用MTT法觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的變化.結(jié)論:1、ERCC1、BRCA1蛋白在卵巢上皮癌組織中的表達(dá)與順鉑化療敏感性相關(guān).hMLH1、HSP27蛋白的表達(dá)與順鉑化療耐藥無關(guān).2、在卵巢癌細(xì)胞系ES-2、SKOV3、COC1、COC1/DDP,ERCC1基因mRNA水平與順鉑敏感性相關(guān),低劑量順鉑可誘導(dǎo)ERCC1基因的上調(diào).不同的細(xì)胞系順鉑對(duì)BRCA1、hMLH1、HSP27基因的