GRP78與卵巢癌化療耐藥的關(guān)系及其機制的研究.pdf

1、第一部分
　　 【目的】研究葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）亞細胞含量與卵巢癌化療耐藥之間的關(guān)系。
　　 【方法】以一對卵巢癌配對細胞株C13K和OV2008為細胞模型，C13K細胞為卵巢癌順鉑耐藥細胞株，OV2008為細胞為卵巢癌順鉑敏感細胞株。運用梯度濃度的順鉑分別處理OV2008及C13K，然后通過MTT法檢測這兩種細胞對順鉑的敏感性；Hoechest-33258染色法觀察順鉑誘導(dǎo)細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；Annexi

2、nⅤ－PI雙染后通過流式細胞儀檢測順鉑誘導(dǎo)的細胞凋亡率；蛋白印跡法(Western blot)檢測順鉑處理前后OV2008和C13K中GRP78蛋白的表達差異。
　　 【結(jié)果】 MTT結(jié)果顯示，隨著順鉑濃度的升高，C13K和OV2008細胞抑制率均上升，而且C13K對順鉑敏感性明顯低于OV2008細胞；流式細胞儀檢測顯示，在同一濃度順鉑作用下，C13K細胞的凋亡率明顯低于OV2008細胞的凋亡率。Western blot檢測結(jié)果

3、顯示，C13K細胞中GRP78蛋白的表達水平明顯高于OV2008細胞，且經(jīng)順鉑處理細胞后，OV2008細胞中GRP78的表達較處理前明顯下降，而C13K細胞株中GRP78的表達未見下降。
　　 【結(jié)論】 GRP78基因的表達同細胞對順鉑的敏感性呈負(fù)相關(guān)，其在一定程度上參與了卵巢癌耐藥的發(fā)生。
　　 第二部分
　　 【目的】通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染SiRNA和GRP78誘導(dǎo)劑，探討GRP78在卵巢癌順鉑耐藥中的具體作用及

4、其機制。
　　 【方法】將公司構(gòu)建的針對GRP78基因的SiRNA通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染至順鉑耐藥株C13K細胞中。用GRP78誘導(dǎo)劑2-脫氧葡萄糖（2-DG）預(yù)處理順鉑敏感株OV2008細胞。經(jīng)順鉑處理這些細胞后，分別用MTT法檢測細胞對順鉑的敏感性，流式細胞儀檢測細胞凋亡率及細胞周期，Western blot檢測相應(yīng)蛋白表達水平。
　　 【結(jié)果】轉(zhuǎn)染SiRNA-GRP78后，C13K細胞中GRP78蛋白的表達較對照組明顯

5、降低。下調(diào)GRP78后，C13K細胞對順鉑的敏感性較對照組顯著提高，流式細胞儀檢測結(jié)果同時顯示，細胞的凋亡率較對照組顯著提高。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)P-Akt表達也隨同GRP78表達下調(diào)；OV2008細胞經(jīng)2-DG預(yù)處理12h小時后，GRP78蛋白表達明顯升高。上調(diào)GRP78后，OV2008細胞順鉑誘導(dǎo)凋亡率明顯降低，同時Western blot檢測發(fā)現(xiàn)P-Akt蛋白表達較對照組明顯升高；OV2008細胞先后經(jīng)過P-Akt抑制